產(chǎn)品概述
本試劑盒基于TaqMan探針法熒光定量PCR技術(shù),專用于豬圓環(huán)病毒(PCV)通用型核酸的定性及定量檢測。適用于臨床組織樣本(淋巴結(jié)、脾、肺等)及血清中PCV的快速篩查與病原學(xué)診斷,兼容PCV1與PCV2的檢測需求。
檢測原理
采用特異性引物與熒光標(biāo)記探針,通過實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增靶標(biāo)DNA片段。探針在擴(kuò)增過程中釋放熒光信號,儀器動(dòng)態(tài)采集信號并生成擴(kuò)增曲線,依據(jù)Ct值判定病毒載量或陰陽性結(jié)果。
試劑盒組分
| 組分名稱 | 規(guī)格/數(shù)量 | 儲存條件 |
| qPCR預(yù)混液(含酶) | 1×50 μL | -20℃避光 |
| PCV通用引物-探針混合液 | 3×20 μL(N+2反應(yīng)) | -20℃避光 |
| 陽性質(zhì)控品(PCV DNA) | 50 μL | -20℃(避免反復(fù)凍融) |
| 陰性質(zhì)控品(無核酸水) | 250 μL | 室溫 |
| 標(biāo)準(zhǔn)曲線稀釋液(1-6號)| 6×100 μL | -20℃ |
樣本處理
組織樣本:取50-100 mg淋巴結(jié)、脾或肺組織,勻漿后離心取上清。
血清樣本:采集靜脈血5 mL,3000 rpm離心10 min,取上清。
DNA提取:建議使用柱式核酸提取試劑盒,洗脫體積50 μL。
操作步驟
反應(yīng)體系配制(20 μL/反應(yīng)):
預(yù)混液:10 μL
引物-探針混合液:3 μL
模板DNA:7 μL
PCR程序:
預(yù)變性:95℃ 5 min
45循環(huán)擴(kuò)增:95℃ 15 sec → 60℃ 1 min(采集FAM通道信號)
結(jié)果判讀
定量檢測
以標(biāo)準(zhǔn)品Ct值繪制log濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算待測樣本病毒載量。
定性檢測
陽性:Ct≤35,且擴(kuò)增曲線呈典型S型。
陰性:Ct≥40或無擴(kuò)增。
灰區(qū)(35<Ct<40):需復(fù)測,復(fù)測Ct<40判為陽性。
注意事項(xiàng)
不同批號組分不可混用,避免反復(fù)凍融(≤5次)。
實(shí)驗(yàn)環(huán)境需分區(qū)(試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)),防止污染。
有效期12個(gè)月,-20℃避光保存。
性能參數(shù)
靈敏度:可檢測≥10 copies/μL的PCV DNA。
特異性:與豬細(xì)環(huán)病毒(TTSuV1)、豬瘟病毒等無交叉反應(yīng)。
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