預(yù)期用途
本試劑盒通過實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù),定性檢測豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(PCV-2)基因組核酸。PCV-2是導(dǎo)致斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)等疫病的主要病原體。適用于臨床樣本(如淋巴結(jié)、脾臟、血清、咽拭子等)的病原學(xué)診斷和流行病學(xué)監(jiān)測。
檢驗(yàn)原理
靶標(biāo)設(shè)計(jì):針對PCV-2基因組保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和TaqMan探針。
擴(kuò)增檢測:在PCR反應(yīng)中,探針與目標(biāo)序列結(jié)合后釋放熒光信號,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀監(jiān)測擴(kuò)增曲線,實(shí)現(xiàn)定性分析。
質(zhì)控設(shè)置:含陽性對照(≥40μl)和陰性對照,確保檢測可靠性。
性能參數(shù)
靈敏度:最低檢測限≤10²拷貝/μl(或CFU)。
特異性:與PCV-1及其他常見豬病原體無交叉反應(yīng)。
重復(fù)性:批內(nèi)變異系數(shù)(CV)≤5%。
適用機(jī)型:兼容ABI、Bio-Rad、Roche LightCycler等主流熒光PCR儀。
樣本要求
類型:新鮮或冷凍的臟器組織(淋巴結(jié)、脾臟等)、血清、咽拭子。
保存與運(yùn)輸:樣本需低溫(-20℃以下)保存,避免反復(fù)凍融。
操作流程
核酸提取:使用配套或第三方提取試劑。
反應(yīng)體系配制:按說明書比例混合引物、探針、酶及模板。
PCR擴(kuò)增:
預(yù)循環(huán):95℃預(yù)變性(2分鐘)。
擴(kuò)增程序:40個(gè)循環(huán)(95℃ 15秒,60℃ 30秒),從第6循環(huán)開始采集熒光信號。
結(jié)果判讀:根據(jù)閾值循環(huán)數(shù)(Ct值)和擴(kuò)增曲線判定陰陽性。
保存條件與有效期
保存溫度:-20℃±5℃避光保存。
有效期:12個(gè)月(未開封)。
注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)需在符合生物安全等級的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。
避免試劑反復(fù)凍融,開封后盡快使用。
檢測結(jié)果需結(jié)合臨床癥狀及其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)綜合判斷。
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