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產品概述
本試劑盒采用實時熒光RT-PCR技術，通過特異性引物和探針（如FAM標記）靶向豬瘟病毒（CSFV）保守區域，實現對病毒核酸的高靈敏度檢測。適用于臨床樣本（如扁桃體、淋巴結組織）或科研樣本中CSFV的快速篩查和輔助診斷。
檢驗原理
基于TaqMan探針法，通過逆轉錄（RT）將病毒RNA轉化為cDNA，隨后進行熒光PCR擴增。探針與目標序列結合后，熒光信號隨擴增循環數增加而增強，通過儀器檢測閾值循環數（Ct值）判定結果。
組分與儲存
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融（建議≤5次），有效期12個月。
核心組分：預混反應液（含酶、dNTPs、緩沖液等）、陽性對照（含靶序列質粒）、陰性對照（無核酸酶水）。
注意事項：不同批號組分不可混用。
適用儀器
兼容主流熒光定量PCR儀，包括但不限于：
ABI 7500/QuantStudio系列
Bio-Rad CFX96
宏石96P
Roche LightCycler
安捷倫MX3000P/3005P
樣本要求
樣本類型：新鮮病變組織（如扁桃體、淋巴結），避免反復凍融。
保存與運輸：
短期（48小時內）：2~8℃冷藏。
長期：置于病毒保存液或-80℃凍存。
核酸提取：推薦使用商業化RNA提取試劑盒（磁珠法或離心柱法），提取后RNA應立即檢測或-80℃保存。
操作步驟
試劑配制（試劑準備區）：
按樣本數（N）+陰陽對照（各1管）計算反應體系，每10份樣本需額外多配1份。
每反應建議體積：XX μL（具體參照試劑盒內附表）。
加樣（樣本處理區）：
將提取的RNA模板與反應液混合，離心后上機。
PCR程序設置：
逆轉錄：50℃ 15-30分鐘
預變性：95℃ 2-5分鐘
擴增循環：95℃ 10-15秒 → 60℃ 30-45秒（40-45循環）
結果判讀：
陽性：Ct值≤閾值，且擴增曲線呈S型。
陰性：無Ct值或Ct值＞閾值。
質量控制
陽性對照：應檢出預期Ct值，否則實驗無效。
陰性對照：應無擴增信號，否則提示污染。
注意事項
實驗分區操作，避免交叉污染。
廢棄組分需按生物危害廢物處理。
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