請問你能介紹一下你自己以及你在SPT Labtech公司的角色嗎？

我叫Huw Rees。作為SPT Labtech北美現場應用科學團隊的一員，我為我們液體處理解決方案的用戶提供專家培訓和應用建議，這些方案包括mosquito®、firefly®和dragonfly®。

NGS中的文庫制備是什么，為什么要自動化？

NGS文庫制備通常包含幾個關鍵部分，下面列出了需要液體處理的關鍵步驟：

幾乎所有試劑盒都需要進行DNA末端制備，即對末端進行修飾，使其適合后續測序。之后是純化步驟，以去除初始制備步驟中的酶和其他試劑。

PCR之后，下一步是在將樣品放入測序儀之前再次進行純化。這些試劑盒非常適合自動化，因為手動操作既費力又耗時。特別是對于多孔板來說，手動準備這些試劑盒需要數小時精確、專注的工作，而且很難掌握。

很難找到能夠迅速、一致且有效地操作這些試劑盒的有經驗的實驗室工作人員。自動化這個過程降低了對專業技能的需求并且使科學家能夠專注于他們研究的其他部分。

自動液體處理器可以移液的體積低于手持移液器能夠處理的體積。使用手持式移液管很難進行微升以下的體積操作，但自動化可以持續穩定地實現這一點。

將NGS文庫制備微縮化有哪些好處？這對每個樣品的成本有何影響？

將NGS文庫制備微縮化很重要，因為它能讓您的投資發揮更大的作用。雖然文庫制備試劑盒效果不錯，但由于其制備涉及的費用（如蛋白質工程和廣泛的研究），因此每個樣品的成本通常都很高。

通過將這些試劑盒微縮化，您可以顯著減少每個反應所需的體積，從而允許您使用相同數量的試劑處理更多樣品，從而節省資金。此外，自動化通過提高實驗室通量進一步增強了這一點優勢。微縮化還減少了您對手動移液的依賴，提供了無人值守的時間，并提高了您工作流程中樣品的通量。

實驗室如何實現更顯著的微縮化？

在高讀取深度的試劑盒中可以實現更顯著的微縮化。例如，NEBNext Ultra II DNA試劑盒可以在mosquito上縮小約十倍，讓您的試劑盒效能提升十倍，從而讓您節省成本。其他試劑盒也可以縮小到類似的程度，甚至更多。

您能多談談關于mosquito以及它是如何通過微縮化來實現投資回報率（ROI）最大化的嗎？

“Mosquito”是我們設計的納升級液體處理儀器，旨在通過微縮化實現投資回報率（ROI）的最大化。Mosquito的槍頭被裝載在儀器頂部的針卷上，該針卷將它們送入移液頭中。這個移液頭可以在五個可用的多孔板架位置上進行吸液操作，支持96孔和384孔兩種規格。槍頭由不銹鋼制成，外層覆蓋高密度聚乙烯，確保了耐用性和精度。每個單獨的槍頭都采用了真正的固相技術，這意味著液體和槍頭之間沒有空氣柱。所以在處理低粘度或高粘度液體時，準確性不會受到影響，因此它可以毫無問題地處理非常粘稠的master mixes或易揮發的混合物，如乙醇。

mosquito 可以處理 500 nL 至 5 μL 的體積，而其低體積型號則能夠處理從 25 nL到1.2 µL的體積。在本次討論中，我將主要關注大體積型號，它具有微縮化磁珠純化的能力。

槍頭的一次性使用幾乎消除了交叉污染的可能性。mosquito 能夠從孔的最底部實現吸液和分液，保證了可忽略不計的死體積至最低，使基因組 DNA 和酶的處理動作非常柔和。這對于NGS文庫制備來說非常重要，因為它避免了泡沫產生和渦旋劇烈等可能破壞酶的問題。

如何使用 mosquito 輕松實現 NGS 文庫制備？

mosquito配備了一套全面的軟件系統，其中包括用于簡化常見 NGS 程序設置的默認向導，如Nextera XT、NEB試劑盒和磁珠純化。該軟件還允許在我們的FAS團隊的幫助下進行自定義實驗設置，使實驗室能夠根據其特定需求對試劑盒進行微縮化。用戶友好的軟件界面允許輕松定制和修改實驗。

一個預加載程序的例子是 NEBNext Ultra II FS DNA 試劑盒。你將在“運行”（Run）頁面開始，該頁面有一個預編寫的詳細說明，列出了它將執行的步驟，以及一個預估的運行時間。

如果需要定制，你可以從“信息”（Information）頁面修改實驗參數，該頁面提供了程序的標題和描述。這個程序被優化以節省試劑槍頭和時間。它還包含了片段化、末端修復、dA加尾、接頭連接和USER酶處理的步驟。

“多孔板”（Plates）標簽頁允許你指定將要使用的多孔板類型。如果有需要，你可以更改這些默認設置。

在“實驗”（Experiment）標簽頁下，如果你運行的樣本數量較少，你可以減少多孔板上的所需試劑放置列的數量。你還能夠修改各列被放置的位置。例如，您可以將ligation mix移至不同的多孔板列中，以減少死體積。

在將多孔板和樣本物理裝載到儀器上后，你只需點擊運行即可。mosquito 隨后會將 fragmentation mix 分配到反應板上，從而完成你的 NGS 文庫制備設置。

你能詳細介紹一下文庫制備后的純化程序嗎？

在完成初始文庫制備和DNA末端處理后，下一步是樣本純化，這涉及到使用磁珠純化程序。mosquito 軟件的向導功能從始至終簡化了這一過程，提供了一個包含了所有必要詳細信息的運行界面。

這個程序涉及五塊板：樣本板、試劑板、樣本板在磁力架上的位置、廢液板和洗脫后純化樣本的輸出位置。

使用相似的向導功能，用戶可以在“多孔板”（Plates）標簽頁下自定義多孔板的類型，并在“實驗”（Experiment）標簽頁中調整磁珠純化程序，例如磁珠比例、乙醇洗滌次數以及是否包含乙醇孵育步驟。用戶還可以選擇運行的樣本數量，并為磁珠、乙醇和其他試劑指定所處列的位置。

一旦設置好多孔板，mosquito 會向樣本中添加磁珠，并對多孔板進行渦旋振蕩和離心。在與樣本進行磁珠孵育后，將多孔板放置在磁力架上進行乙醇洗滌步驟，mosquito 會通過添加和移除乙醇來處理。

然后，將多孔板從磁力架上移開，加入洗脫緩沖液以重新懸浮磁珠，然后將多孔板重新放回磁力架上，以確保最終樣本中不含有任磁珠。

這個程序只是mosquito支持的眾多工作流程之一。我們擁有大量的引用文獻和相關材料，支持從始至終的不同程度的微縮化完整NGS工作流程。

你能舉個例子說明mosquito如何降低每個樣本的成本嗎？

市場上兩種強大且知名的試劑盒是Illumina Nextera XT和Illumina DNA制備試劑盒。通過使用mosquito，我們始終如一地實現了十倍微縮化——在Nextera XT的情況下更是達到了12.5倍——從而顯著降低了每個樣本的成本。

例如，使用384孔樣本板，您只需處理八塊整板就能支付您實驗室中mosquito儀器的成本。這意味著您將很快看到投資回報。在一些實驗室中，這種高通量水平是很常見的，使得mosquito能夠在幾周內就收回成本。

您想分享一些有關Mosquito的令人興奮的更新嗎？

我們最近剛剛推出了Mosquito家族的最新成員——Mosquito Gen3。這是迄今為止我們最緊湊、最易于使用的版本，它提供了Mosquito的所有功能，但僅具有三個孔板位置和更小的占地面積。通過Gen3，我們正在降低微縮化的門檻，因此，更多的基因組學研究人員可以從減少NGS體積的成本節約中受益。