顯微課堂：STELLARIS Cryo 冷凍共聚焦顯微鏡的優(yōu)勢與應(yīng)用

STELLARIS Cryo是一款共聚焦顯微鏡系統(tǒng)，旨在幫助您定位感興趣的區(qū)域，以便進行原位冷凍電鏡。STELLARIS Cryo為您提供可靠的目標定位精準度，同時還能提供您可以信賴的卓越性能，并提高實驗樣本的安全性。

為您鎖定冷凍電子斷層掃描

工作流程中的關(guān)鍵目標

以3D方式解析并識別細胞內(nèi)靶點

對于相關(guān)工作流程，至關(guān)重要的是獲取低溫顯微鏡下識別的確切靶點坐標，因為熒光信號在隨后的電子顯微鏡步驟中不可見。

我們的LAS X Coral Cryo軟件能夠在納米尺度上精準定位開放格式的坐標標記。不同的標記類型提供不同的功能，還可用于地標、薄片和熒光小體標記。配備LAS X Coral Cryo軟件的STELLARIS Cryo顯微鏡以開放文件格式提供3D共聚焦數(shù)據(jù)，這些數(shù)據(jù)可以導(dǎo)入到任何電子顯微鏡軟件：TIFF、LIFE、ome.tiff。

LAS X Coral Cryo：基于插值的3D目標定位，沿著x軸和y軸對切片進行多層掃描(z-stack)。可以在所有相關(guān)窗口中交互式地移動標記。

減少STELLARIS Cryo 冷凍共聚焦與cryo-FIB之間的處理步驟。

我們提供專用的Coral Cryo冷凍電子斷層掃描工作流程，可確保樣本活性、進行質(zhì)量檢查，重要的是確保3D成像精準可靠。

STELLARIS Cryo包含冷臺和傳送梭，旨在與LAS X Coral Cryo軟件配合使用，并提供適用于冷凍聚焦離子束(FIB)或真空冷凍傳輸(VCT500)載物臺的各種無縫集成和傳送選項。新的冷臺擴大了非冷凍應(yīng)用中的工作范圍，從而提升了STELLARIS共聚焦成像的可用性。

由于所有組件均兼容，您可以在樣本傳送過程中保持樣本安全。

Coral Cryo 3D冷凍電子斷層掃描工作流程解決方案

新一代STELLARIS

觀察每個樣本中更微小的細節(jié)，捕捉更微弱的信號，并在整個光譜范圍內(nèi)收集更精確、更可靠的數(shù)據(jù)。

利用基于熒光壽命的信息，在實驗中增加一個額外的維度，有助于獲得突破性的發(fā)現(xiàn)。

簡化了設(shè)置和導(dǎo)航，可提高工作效率。

透明化處理的擬南芥根樣本的平均到達時間圖像(TauContrast)。樣本來源：美國加利福尼亞州拉荷亞索爾克研究所W. Busch。

我們的Power HyD檢測器系列、整體優(yōu)化的光路與新一代白激光之間協(xié)同整合，可提供出色的成像性能。即使在對低豐度標記樣品成像時，您也可以從更明亮的信號、更高的對比度和靈敏度中獲得更清楚的成像結(jié)果。

運用獨特的LIGHTNING檢測理念，盡可能地從您的玻璃化冷凍樣本中提取信息，獲得對科學(xué)問題的深入解答。這是一個自適應(yīng)的信息提取過程，可以呈現(xiàn)圖像信息中的精細結(jié)構(gòu)和細節(jié)。

因此，您可以更精準地定位感興趣的3D結(jié)構(gòu)：在室溫和冷凍條件下，為電鏡顯微成像工作流程的后續(xù)步驟做好準備。

在電鏡載網(wǎng)上快速冷凍的哺乳動物細胞。細胞器染色：Tag BFP（細胞核，藍色）、Cerulean（細胞膜，綠色）、hmAzami-Green（線粒體，橙色）、mCitrine（高爾基體，紅色）、mCherry（內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，品紅色）、反射（載網(wǎng)和碳膜層可視化，白色）。樣本來源：德國多特蒙德馬克斯·普朗克分子生理學(xué)研究所 Oleg Sitsel 博士。比例尺xy：10 µm；z：1 µm。

在冷凍電子顯微鏡中，至關(guān)重要的是在整個工作流程中監(jiān)測冰層厚度，而且越早檢查和評估越好。如果冰層太厚，會在銑削階段造成問題，而如果冰層太薄，又可能會影響樣本的穩(wěn)定性。

STELLARIS Cryo提供了兩種冰層厚度檢查模式：快速攝像概覽模式和共聚焦反射模式，后者以3D方式確定冰層厚度。

Cryo CLEM物鏡HC PL APO 50x/0.90專為滿足冷凍光學(xué)顯微成像需求而開發(fā)，提供超分辨率優(yōu)勢，同時又無需浸沒液體。

哺乳動物細胞顯示Hoechst（藍色，細胞核），Mitotracker Green（綠色，線粒體）、Bodipy（紅色，脂滴）、熒光珠（品紅色，1µm），反射（白色）。比例尺10µm：細胞由德國海德堡歐洲分子生物學(xué)實驗室Mahamid團隊的Ievgeniia Zagoriy提供

STELLARIS重新定義共聚焦顯微鏡，在每個實驗中為您提供額外維度的信息。有了TauSense，基于熒光壽命的顛覆性新工具唾手可得。只需點擊幾下，您便可消除無用信號，展示圖像中的更多細節(jié)，在單個實驗中多路復(fù)用更多標記，分離具有重疊光譜的熒光團，并通過基于熒光壽命的信息來探索局部的功能和微觀環(huán)境的變化。有了TauSense，STELLARIS為您的研究開啟了各種全新的可能性。

使用STELLARIS Cryo中的TauSense，您可以利用熒光壽命可能存在的差異來分離重疊的熒光團。TauSense還可用于識別信號中的干擾成分，如載網(wǎng)反射。

用TauSense成像工具檢查矽藻。TauSeparation：左圖：組分1刻畫出葉綠體的自發(fā)熒光，光子平均到達時間0.1ns。中圖：組分2顯示肌動蛋白絲干凈的LifeAct-GFP信號，平均到達時間2.7ns。右圖顯示TauContrast：該查詢表用顏色表示到達時間：藍色表示到達時間較短，黃色（趨于紅色）表示到達時間較長。樣本由德國德累斯頓工業(yè)大學(xué)B CUBE分子生物工程中心的Nicole Poulsen提供。

在整個冷凍工作流程中，樣本玻璃化后必須立即保持在除濕和冷凍條件下。冷凍顯微成像套件配備冷臺和傳送梭，可以確保安全、直觀地進行樣本裝載和直接傳送，同時始終將標本保持在理想的冷凍條件下。

冷臺保持氮氣對周圍空氣的恒定過壓，使您能夠在穩(wěn)定的冷凍條件下進行光學(xué)顯微成像。冷臺支持進行高分辨率3D成像所需的所有移動。

為提高裝載過程的安全性，可選擇使用一個放置傳送梭的環(huán)境保護罩。該環(huán)境保護罩可確保在所有條件下安全裝載，從而提供額外的過程控制，并延長安全裝載時間窗。