小鼠IVF-ET實驗操作的流程與注意事項

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一、小鼠體外受精-胚胎移植概念

體外受精（In Vitro Fertilization，IVF）是指將經(jīng)體外獲得的成熟小鼠卵母細胞與已在體外完成獲能的精子混合，使其受精并形成受精卵（合子）的全過程。

不過，由于哺乳動物胚胎在體外條件下通常只能發(fā)育到囊胚等早期階段，若要獲得存活后代，必須將其通過胚胎移植（Embryo Transfer，ET）植入假孕母鼠子宮內(nèi)完成妊娠。因此，在實驗動物學中，體外受精與胚胎移植常合稱為 IVF-ET 技術。

二、實驗前準備

1、材料與試劑

● 實驗動物：

供體鼠：SPF級超排卵雌鼠（3-5周齡，品系匹配）

精子來源：生育能力良好的雄鼠（通常8-16周齡），或凍存精子

受體鼠：SPF級假孕母鼠（與供體鼠同步發(fā)情）

● 核心試劑：

超數(shù)排卵激素：PMSG（孕馬血清促性腺激素）、hCG（人絨毛膜促性腺激素）

受精液、獲能液：小鼠精子獲能液TYH、小鼠體外受精液HTF

● 設備： 體視顯微鏡、CO₂培養(yǎng)箱、超凈工作臺

2、環(huán)境要求

● SPF級操作間：超凈工作臺，定期消毒滅菌。

● 溫度控制：操作臺溫度恒定25℃，培養(yǎng)基預溫至37℃。

三、操作流程

①　3-5周齡雌鼠腹腔注射PMSG。

②　46-48小時后再注射hCG。

③　14-16小時后先取雄鼠的附睪尾，將精子收集至獲能皿培養(yǎng)1小時，激活精子。

④　然后摘取雌鼠的輸卵管，收集卵母細胞，移入受精滴。

⑤　接著將完成獲能的精子加入受精滴，進行體外受精。

⑥　4-6小時后，將受精的卵母細胞轉(zhuǎn)移至清洗滴中，清洗3遍，放回培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)。

⑦　第2天挑選優(yōu)質(zhì)的2細胞胚胎，進行胚胎移植。

⑧　等待19天左右，乳鼠出生。

四、IVF-ET技術的應用價值

1、生物凈化和提高微生物等級

2、克服特殊品系繁殖障礙

3、高效利用寶貴的雄鼠資源

4、拯救珍貴品系和復蘇冷凍品系

5、快速獲得大量年齡高度一致的后代

6、縮短品系繁殖周期和降低實驗成本

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