PLA技術(shù)在蛋白翻譯后修飾（PTMs）檢測研究中的應用
蛋白翻譯后修飾 (PTMs)
蛋白質(zhì)是細胞功能的主要執(zhí)行者，而蛋白翻譯后修飾通過在蛋白質(zhì)上添加或移除特定化學基團，精細地調(diào)控蛋白質(zhì)的活性、定位、穩(wěn)定性及與其他分子的相互作用。常見的 PTM 包括：
- 磷酸化：磷酸基團的添加，通常由蛋白激酶催化，可以改變蛋白質(zhì)的活性、定位和與其他蛋白質(zhì)的相互作用。
- 糖基化：糖基的添加，可以影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性、溶解度和與其他蛋白質(zhì)的相互作用。
- 泛素化：泛素蛋白的添加，可以標記蛋白質(zhì)進行降解。
- 乙酰化：乙酰基的添加，可以影響蛋白質(zhì)的活性、穩(wěn)定性和與其他蛋白質(zhì)的相互作用。
PTMs在細胞信號傳導、代謝、細胞周期調(diào)控、免疫反應和疾病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。例如，磷酸化可以調(diào)節(jié)酶的活性，糖基化可以影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和定位，泛素化可以標記蛋白質(zhì)進行降解。PTMs 異常與疾病相關(guān)，以癌癥為例，一些癌基因的過度磷酸化會導致細胞生長失控，而一些抑癌基因的過度泛素化會導致其降解，從而促進腫瘤生長。
Schematic PTM discovery timeline for 10 major PTMs
臨近連接技術(shù) (PLA)
PLA技術(shù)由瑞典NAvinci技術(shù)公司開發(fā)，其核心原理基于臨近效應引發(fā)的信號放大（Söderberg, O. et al. (2006). Direct observation of individual endogenous protein complexes in situ by proximity ligation. Nature Methods, 3(12), 995 - 1000.）。
PLA 實驗流程：該技術(shù)使用兩對抗體，每對抗體分別連接一段獨特的寡核苷酸序列。當這兩對抗體特異性地結(jié)合到目標蛋白復合物上彼此靠近（通常距離在40nm內(nèi)）時，連接在抗體上的寡核苷酸序列也隨之靠近。此時，通過DNA連接酶將相鄰的寡核苷酸連接起來，形成一個完整的可擴增的DNA環(huán)。隨后，利用滾環(huán)擴增技術(shù)（rolling circle amplification, RCA）對這個DNA環(huán)進行大量擴增，產(chǎn)生一條長鏈的單鏈DNA，其上包含多個重復的序列單元。最后，通過熒光標記的互補寡核苷酸探針與擴增后的DNA鏈雜交，借助熒光顯微鏡或其他熒光檢測設備即可檢測到熒光信號，熒光信號的強度與目標蛋白復合物的數(shù)量成正比，從而實現(xiàn)對目標蛋白復合物的定性和定量檢測
PLA 技術(shù)檢測PTMs 應用案例
- 磷酸化HER2 檢測
采用Naveni pY HER2試劑盒檢測，Detection fluorophore TEX615
- 磷酸化EGFR 檢測
采用Naveni pY EGFR試劑盒檢測，Detection fluorophore TEX615
同時也可以選擇斯達特各類修飾抗體搭配NaveniFlex 試劑盒實現(xiàn)多種磷酸化蛋白檢測
產(chǎn)品信息
杭州斯達特(www.starter-bio.com)志在為全球生命科學行業(yè)提供優(yōu)質(zhì)的抗體、蛋白、試劑盒等產(chǎn)品及研發(fā)服務。依托多個開發(fā)平臺：重組兔單抗、重組鼠單抗、快速鼠單抗，重組蛋白開發(fā)平臺（E.coli,CHO,HEK293,Insect Cells），已正式通過歐盟98/79/EC認證、ISO9001認證ISO13485。
