數字PCR在定量MSC-ex中miR-27b-3助力肝纖維化研究的應用

導讀

肝纖維化是全球范圍內導致慢性肝病和肝硬化的主要病因，每年導致數百萬人死亡。其病理特征為肝臟中過度的細胞外基質（ECM）沉積和膠原交聯，最終可能發展為不可逆的肝硬化或肝癌。盡管多年來研究人員在肝纖維化的分子機制上取得了諸多進展，但由于病理復雜、分子標記物難以精確檢測，當前的治療手段仍然有限，缺乏有效的非侵入性診斷工具成為了肝纖維化早期檢測的難點之一。
江蘇大學附屬無錫市人民醫院的研究人員在Journal of Nanobiotechnology發表了題為《Mesenchymal stem cell-derived exosomal miR-27b-3p alleviates liver fibrosis via downregulating YAP/LOXL2 pathway》的文章。

作者采用naica微滴芯片數字PCR系統定量分析間充質干細胞（MSC）衍生的外泌體（MSC-ex）中所攜帶的miR-27b-3p。這項技術通過其高度敏感的分子檢測能力，成功揭示了miR-27b-3p在外泌體中的富集情況，并通過抑制YAP/LOXL2通路，抑制膠原蛋白的沉積，減緩肝纖維化進程。

 應用亮點：

 首次提出通過MSC-ex中的miR-27b-3p調控YAP/LOXL2信號通路來緩解肝纖維化，展示了MSC-ex在抗纖維化治療中的潛力。

 使用naica微滴芯片數字PCR系統精準定量MSC-ex中的miRNA，為外泌體中的微量miRNA功能研究提供了定量分析手段。

 首次證明miR-27b-3p通過抑制YAP轉錄因子下調LOXL2的表達，揭示了MSC-ex抗纖維化作用的背后機制，為治療肝纖維化提供了新思路。

實驗結果：

研究人員旨在通過數字PCR（dPCR）技術確定MSC-ex中miR-27b-3p的含量。因為miR-27b-3p在抑制肝纖維化中可能起到了關鍵作用，特別是通過靶向YAP蛋白的3'非翻譯區（3'UTR）抑制YAP蛋白的表達。

作者從MSC-ex中提取了125 ng的RNA，逆轉錄成cDNA，每個dPCR反應使用500 ng的cDNA。dPCR結果顯示MSC-ex中的miR-27b-3p數量為742 copies/104 particles。這個定量結果對于理解miR-27b-3p在外泌體中的分布和潛在的生物學功能至關重要。

* 圖 A展示了使用dPCR技術檢測MSC-ex中miR-27b-3p的熒光強度。
圖 B展示了dPCR檢測的每104個MSC-ex particles中miR-27b-3p的拷貝數。
 

通過了解MSC-ex中miR-27b-3p的精確數量，研究人員可以更好地評估這些外泌體在治療肝纖維化中的潛力。例如，他們可以評估需要多少外泌體來達到治療效果，以及這些外泌體如何在體內分布和作用。
 

結論：

該研究利用數字PCR對MSC-ex攜帶的miR-27b-3p進行定量分析，結果顯示其在MSC-ex中具有顯著富集。這一microRNA通過調控YAP/LOXL2信號通路，有效降低了肝纖維化進程中的膠原沉積和肝細胞損傷。實驗結果進一步證明，數字PCR 憑借其高度敏感和絕對定量的優勢，為肝纖維化的早期診斷和病理研究提供了全新思路，并有望成為推動抗纖維化治療策略優化的重要工具。