超順磁硅羥基磁珠應用于小片段核酸提取

小片段核酸提取用超順磁硅羥基磁珠(6um,120mg/mL)
磁珠法核酸提取技術是以納米生物磁珠為載體的一種新型核酸提取技術，核酸分子可與磁珠表面的硅羥基發生特異性識別與結合，在外部磁場的作用下發生聚集或分散，徹底擺脫傳統核酸提取過程中離心、抽取上清液等手工操作流程，從而實現核酸提取純化的方法。目前所使用的磁珠大多數都是“核-殼”結構，都是以具有超順磁性的納米微粒作為“核”，再在核的表面包裹上一層高分子有機化合物和一層功能基層作為“殼”，在溶液中有較好的懸浮性。在磁場中被磁化，在磁力的作用下聚集，極易與不具有磁性的物質分離開來，操作過程中無需離心等操作。

磁珠粒徑選擇？

粒徑較大的磁珠，磁響應性比較大，捕獲小片段核酸的能力大一點。粒徑較小的磁珠，磁響應性比較小，捕獲大片段核酸能力大一點。

上海惠誠生物提供6um超順磁硅羥基磁珠(Cat No. HA21015)，濃度：120mg/mL; 40s磁響應(%):＞90%；600s磁響應(%):100%。
什么是磁分離?

磁分離利用磁場將微米大小的順磁顆粒從懸浮液中分離出來。在分子生物學中，磁珠提供了一種簡單可靠的純化各種類型生物分子的方法，包括基因組DNA、質粒、線粒體DNA、RNA和蛋白質。

例如，在優化條件下，DNA選擇性地結合到適當涂層的珠表面，將污染物留在溶液中。然后，你可以直接在分子生物學應用中使用這種純化的DNA。

使用磁珠的一個關鍵優勢是，你可以直接從原始樣品中分離出核酸和其他生物分子，以及從各種不同類型的樣品中分離出核酸和其他生物分子，只需很少的處理。這將磁珠與其他核酸分離方法區別開來，其他方法可能對不同類型的樣本有不同的方案，并且需要更多的動手時間。

磁力架

磁力架提供了一種快速簡單的方法來純化特定的蛋白質，核酸和其他生物分子。利用磁珠將目標生物分子從生物樣品中分離出來。對樣品混合物施加磁力，被磁珠吸引的感興趣分子從混合物中分離出來。磁分離技術在DNA和mRNA純化、細胞分離、蛋白質純化等方面有廣泛的應用。上海惠誠生物提供50毫升磁力架，具有強大的，可移動的磁力和易于移液管訪問。它有助于從各種液體樣品介質中捕獲、保留和釋放磁珠，允許多達6個50mL樣品的高通量并行處理。

磁珠法核酸提取由裂解、結合、洗滌、洗脫等步驟組成，不同廠家生產的磁珠法核酸提取試劑有所不同，主要體現在：（1）磁珠大小不同；（2）磁珠修飾方式不同；（3）洗滌方式不同；（4）樣本量不同。

磁珠法如何提取DNA?

磁珠法提取DNA依賴于使用帶有涂層的磁珠，只需調整緩沖條件就可以可逆地結合核酸。
 
核酸提取步驟

1. 樣品準備

a) 過夜培養的菌液，轉移至50 mL離心管，在離心機的水平轉子上4000 rpm離心10 min，盡棄上清。

b) 將5 mL P1 Buffer（已加入RNaseA酶溶液）加入至50 mL離心管，菌體充分懸浮。

c) 加5 mL P2 Buffer到已懸浮好的菌液中，緩慢搖動混合均勻（不能劇烈震蕩），進行裂解。操作時間不能超過5min，防止基因組污染。

d) 再向裂解體系中加入7 mL P3 Buffer，緩慢搖動混合均勻（不能劇烈震蕩），出現絮狀物沉淀。

e) 將中和后的50 mL離心管在離心機的水平轉子上4000 rpm離心20 min。

f) 取出離心后的50 mL離心管，轉移14 mL上清至新的50 mL離心管中。

2. 質粒抽提

a) 添加2.5 mL磁珠至上述新的50 mL離心管中，完成后再加入16.5 mL的Binding buffer（已加無水乙醇）至新的50 mL離心管中。

b) 放置旋轉架上，孵育10 min。

c) 放置磁力架上，靜置1-2 min，盡棄上清。

d) 加入30 mL Wash buffer（已加無水乙醇）至新的50 mL離心管中，放置旋轉架上，孵育1 min。重復一次。

e) 放置磁力架上，靜置1-2 min，盡棄上清。

f) 放置37℃培養箱 10 min，直到磁珠中酒精蒸發完全。

g) 加入500-1mL無菌水溶解，孵育3-5 min。

h) 放置磁力架上，靜置1-2 min，轉移上清之EP管中。

i) 使用分光光度計檢測A260。

【注意事項】

1. 試劑時間長可能會出現沉淀，使用前輕輕搖晃混合均勻。也可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2. 磁珠使用前充分搖勻。RNase保存在-20℃。試劑盒其他成分置于常溫保存。

3. Buffer P1加入后一定要充分懸浮細菌，要保證看不到結塊的菌，否則細菌不易被裂解，質粒產量會顯著下降。

4. Buffer P2是否有沉淀。如有沉淀可用水浴（37℃）加熱溶解，混勻后使用。

5. 基因組污染：Buffer P2和P3加入后輕輕搖晃，防止基因組斷裂。

上海惠誠生物提供一站式科學服務，覆蓋生命科學領域和分析化學領域設計開發全過程，提供實驗室設計、實驗室建設、儀器設備、耗材、試劑、技術服務等專項配套服務。按照客戶的研發、生產和質量控制環節整合各種優質資源，優化資源組合，為客戶提供整體解決方案。