Western blot免疫蛋白印跡法的發(fā)展、應(yīng)用及傳統(tǒng)濕轉(zhuǎn)跟半干轉(zhuǎn)優(yōu)缺點(diǎn)

WB最初是由Towbin等人于1979年提出，并稱(chēng)之為免疫印跡法(immunoblotting)[1]
后于1982年由Burnette將免疫蛋白印跡法稱(chēng)為Western Blotting[2]。
 

使用含8M尿素的18%聚丙酰胺凝膠分離大腸桿菌核糖體總蛋白后分別進(jìn)行考凝膠馬斯亮染色（圖A）與膜上蛋白印跡酰胺黑染色（圖B）
 

 
Western Blot應(yīng)用[3]：

  Western Blot法實(shí)際上是凝膠電泳技術(shù)、固定化技術(shù)及分子親和技術(shù)三者融為一體的綜合性技術(shù)，其核心在于把WB轉(zhuǎn)膜。

WB轉(zhuǎn)膜是將通過(guò)電泳分離后的蛋白轉(zhuǎn)移到固相載體上，如PVDF膜。我們常用電泳印跡法進(jìn)行蛋白轉(zhuǎn)移，電泳轉(zhuǎn)移的方式分為濕轉(zhuǎn)和半干轉(zhuǎn)。兩者雖然名稱(chēng)不一，但是原理是一樣的，使用三明治結(jié)構(gòu)（即濾紙-膜-凝膠-濾紙的結(jié)構(gòu)），在電場(chǎng)正負(fù)極作用下將帶負(fù)電的蛋白從凝膠轉(zhuǎn)移至載體膜上。蛋白呈現(xiàn)負(fù)電的原因是因?yàn)榈鞍椎入婋奝I一般為6，在溶液中PH>PI時(shí)蛋白呈負(fù)電[4]。
 
傳統(tǒng)濕轉(zhuǎn)跟半干轉(zhuǎn)，各有優(yōu)缺點(diǎn)。100KD以下蛋白適用半干轉(zhuǎn)，且半干轉(zhuǎn)速率快。因?yàn)榘敫赊D(zhuǎn)的電流不會(huì)側(cè)漏，全都在濾紙之間，所以轉(zhuǎn)的效率比較高，速度快，缺點(diǎn)是有效離子濃度衰減快，可能幾分鐘就耗盡了，這個(gè)時(shí)候大蛋白還沒(méi)來(lái)得及轉(zhuǎn)上，再加上產(chǎn)熱大，可能燒糊。相反的，濕轉(zhuǎn)則是有效電流少，不全在濾紙之間，會(huì)從緩沖液間側(cè)漏，所以轉(zhuǎn)的效率低下，速度就慢了，但是有效離子濃度高，能夠長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)行轉(zhuǎn)膜，因此適用于100KD以上的大分子蛋白的轉(zhuǎn)膜。那么能不能既能有效減少電流側(cè)漏的同時(shí)，又不斷補(bǔ)充有效離子的方法呢？有，中科通儀就做到了。

中科通儀自主研發(fā)生產(chǎn)的專(zhuān)利產(chǎn)品M-Blot快速轉(zhuǎn)膜儀是濕轉(zhuǎn)和半干轉(zhuǎn)的結(jié)合，從根本上解決了傳統(tǒng)濕轉(zhuǎn)和半干轉(zhuǎn)的一些問(wèn)題。
 
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