如何使用KeyPro污染凈化儀防止RNA的降解和保證PCR的結果準確性

瀏覽次數：2606　發布日期：2020-2-19　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

在此次的新型冠狀病毒疫情中，核酸檢測作為確診的金標準發揮著重要的作用。眾所周知，本次新冠病毒的核酸檢測流程為采樣（咽拭子、肺泡灌洗液），提取病毒RNA，再經過RT-qPCR或者一步法RT-數字PCR檢測樣本。但近期關于核酸檢測準確性的討論也甚囂塵上，其中PCR實驗污染是導致實驗有偏差的原因之一，造成PCR實驗污染的主要原因有以下幾點，樣本間交叉污染（樣本泄漏引起的交叉，樣本提取過程中移液器、耗材的污染），PCR試劑的污染（容器、耗材、移液器，水等被污染），PCR擴增產物污染，氣溶膠污染，克隆質粒污染等。

在病毒核酸檢測過程中，結果的準確性除了檢測方式的靈敏度很重要以外，保證提取RNA樣本的完整性也十分重要。今天我們就聊聊如何防止RNA降解，獲得高質量的RNA進行后續試驗。導致RNA降解最主要的物質就是RNase，RNase非常穩定，且無處不在，用常規的高溫高壓蒸汽方法和蛋白酶抑制劑不能使所有的RNase完全失活。

RNase結構

除上述方法外，研究人員最常用的就是使用DEPC等對實驗過程中使用的耗材和試劑進行處理，但DEPC處理時間長且有毒，下面給出遠離DEPC的三大理由：

1、DEPC 對人體有害，DEPC為高活性烷化試劑，能對蛋白質進行共價稀釋，使其組氨基團的乙氧基甲酸化（RNase 活性位點有兩個組氨基酸，故能被滅活）；同時能使 RNA 分子中沒配對的腺嘌呤羥甲基化，改變其活性，嚴重時會影響 RNA 形成雜交雙鏈的能力，歸為強致癌物，使用時要十分小心。

2、不能處理一些試劑：例如：一級胺的試劑TRIS，PBS等，會發生化學反應；二是不能高壓滅菌的試劑，DTT，dNTP，Mgcl2，因為 DEPC必須通過高壓滅菌去除；三是不能用于PH低于4及以下的試劑，DEPC在此條件下對RNase沒有滅活作用。

3、DEPC不適合某些實驗，測OD值的實驗，OD讀數跟 PH 有關， DEPC 在溶液中分解后變成乙醇和二氧化碳，部分二氧化碳與水反應形成碳酸，導致 PH 降低，進而降低OD值。

實驗者迫切需要一種非常快速且方便的去除RNase的方法，保證結果的準確性。使用 KeyPro™KP100生物污染紫外凈化儀，通過275nm和365nm雙紫外的協同作用可在5min解除上述污染煩惱。免清洗，無化學殘留，方便快捷，適用于高保真 RNA 文庫制備，測序和 PCR 實驗室中的微孔板去污、移液器、水、金屬、陶瓷、塑料、玻璃等表面RNase的滅活等。同時KeyPro™KP100還可以去除病毒和細菌等的污染，防止實驗用品導致的實驗結果和環境污染。