遠離噪音點：western blot封閉那些事

Western blot封閉步驟為什么重要？
 
樣品從凝膠轉印到膜上后，在抗體孵育之前都要進行封閉的步驟。 了解封閉的工作原理可提高western blot的質量，提高數據的特異性，靈敏度和信噪比。
 
蛋白封閉液是如何工作的？
通用的PVDF膜和NC膜具有很強的蛋白結合能力，如果跳過封閉步驟，一抗或二抗可能非特異性地與膜結合，導致高背景或“噪音點”的印跡（ 圖1）。 封閉緩沖液覆蓋或“封閉”這些非特異性蛋白結合位點，確保大部分一抗僅與靶蛋白結合（圖2）

如果選擇有效的封閉緩沖液，可以減少非特異性結合而不干擾抗體 - 抗原結合。


如何進行封閉液的選擇？
 選擇正確的封閉緩沖液取決于幾個因素，包括一抗的靶標和正在使用的檢測系統。 一些最常用的封閉緩沖液含有蛋白質封閉試劑。 蛋白封閉試劑可以是蛋白質混合物，例如脫脂奶粉或血清，或單一蛋白質，例如BSA。 脫脂奶粉是一種流行的封閉試劑，因為價格低廉且易于找到。 然而，牛奶含有磷蛋白，可能干擾抗磷酸化蛋白抗體western blot檢測。 牛奶還可以干擾基于生物素 - 鏈霉抗生物素蛋白的檢測系統。 在這些情況下，含有BSA的封閉緩沖液可能是優選者。 或者，為了避免抗體和蛋白封閉試劑之間潛在的交叉反應，可以使用無蛋白封閉試劑如PVP-40。
Azure Fluorescent Blot Blocking Buffer經過優化，配合Azure多功能成像系統和sapphire雙模式多光譜激光成像系統使用，可降低背景噪音和產生穩定熒光信號。