總蛋白染色劑替代麗春紅S用于熒光Western Blots的優勢
麗春紅S是一種快速，可逆的蛋白質染色劑，通常用于確認蛋白樣品是否成功地從凝膠轉移到膜上，然后研究人員進行免疫印跡過程。 轉印后對膜進行染色可以在用抗體孵育印跡之前快速且容易地識別一些轉印的問題，例如由于存在氣泡而導致的條帶不完全、不均勻的轉移和偽影。 此外，染色膜上的總蛋白為總蛋白標準化定量提供了標準。
然而，盡管麗春紅染色是可逆的，但它與熒光Western印跡檢測不相容。 即使在徹底脫色后，麗春紅染色也會在膜上留下自發熒光殘留物，增加背景熒光。
下圖顯示了多色熒光蛋白印跡。 右半部分使用麗春紅染色，然后在免疫印跡前進行脫色。
然后用Azure Fluorescent Blot Blocking Buffer封閉兩半印跡膜，并使用如圖中標記的四種不同熒光探針檢測四種蛋白。使用Azure cSeries RGB模塊對印跡進行成像， 盡管徹底脫色，但在用麗春紅染色的一半印跡上看到非常高的熒光背景。
下圖顯示使用Azure cSeries NIR模塊拍攝的相同印跡，該模塊評估了700nm和800nm通道。 在NIR成像印跡中熒光背景減少，但與未染色的一半印跡相比仍然具有高背景。
下圖顯示使用Azure cSeries NIR模塊拍攝的相同印跡，該模塊評估了700nm和800nm通道。 在NIR成像印跡中熒光背景減少，但與未染色的一半印跡相比仍然具有高背景。
為避免由于麗春紅染色導致的高背景，可考慮使用其他總蛋白質染色劑.2 AzureRed熒光總蛋白染色與下游Western印跡檢測完全兼容，包括熒光檢測和下游質譜。
AzureRed熒光蛋白染色是熒光western blotting定量的理想選擇。寬廣的線性動態范圍確保AzureRed成為解決蛋白上樣變化的有效標準。 AzureRed的一個關鍵特性是將其融入現有western blotting工作流程的簡單性（圖3）。
圖3.使用azurered進行的總蛋白質標準化很容易適合任何蛋白質印跡工作流程
AzureRed染料可與常用熒光探針同時檢測，無干擾，允許在一張印跡膜上評估多種蛋白質。使用AzureRed可以進行多色印跡的總蛋白質標準化，不需要剝離和脫色，可以在一張印跡膜上定量多種蛋白（圖4）0。 該方法快速，可以與感興趣蛋白一同成像。有關AzureRed熒光蛋白染色的更多信息，請訪問www.azurebiosystems.com。
AzureRed染料可與常用熒光探針同時檢測，無干擾，允許在一張印跡膜上評估多種蛋白質。使用AzureRed可以進行多色印跡的總蛋白質標準化，不需要剝離和脫色，可以在一張印跡膜上定量多種蛋白（圖4）0。 該方法快速，可以與感興趣蛋白一同成像。有關AzureRed熒光蛋白染色的更多信息，請訪問www.azurebiosystems.com。
圖4.AzureRed與三種感興趣的蛋白同時成像。
向凝膠中加入稀釋的HeLa細胞裂解物。轉印后，將印跡用AzureRed染色，然后在不脫色情況下加入tubulin，ß-actin和GAPDH探針。用Sapphire 雙模式多光譜激光成像系統掃描成像。四個通道進行疊加，總蛋白質（AzureRed染色）以灰色顯示;tubulin-紅色，ß-actin-藍色和GAPDH-綠色
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