sapphire檢測殘留的宿主細胞蛋白HCP的方法

許多生物制品例如抗體，重組蛋白，疫苗等的制備還是通過生物體系細胞工程合成，盡管采用多種純化方式，在生物藥物中還會有微量的宿主蛋白殘留（HCP），會對藥品的安全性及藥性產生影響。

一、HCP的概念

HCP：Host cell protein，宿主細胞蛋白

疫苗、抗體、重組蛋白藥物等生物制品的生產主要利用某些細胞諸如非洲綠猴腎細胞（Vero細胞）和中國倉鼠卵巢（CHO）細胞，大腸桿菌等材料，這些細胞稱為宿主細胞。

在純化工藝中會有宿主細胞分泌至培養基中的蛋白質或死亡破碎細胞的結構蛋白殘留在生物制品中，這些蛋白被稱為宿主細胞蛋白。例如vero細胞HCP是指疫苗中來源于宿主細胞蛋白和轉化蛋白，以vero細胞為基質細胞生產疫苗的過程是將病毒接種于vero細胞，病毒利用細胞環境復制自身，同時導致宿主細胞結構受損、死亡，釋放大量

的宿主細胞結構蛋白于疫苗中，這部分蛋白有可能成為疫苗中的過敏原vero細胞生長的同時向培養液中釋放生長因子等促生長蛋白，可引起細胞的增值和分化，vero細胞結構蛋白和促生長蛋白構成了宿主細胞蛋白。

• 為什么要檢測殘留HCP

· 生物制品中殘留的宿主細胞蛋白（HCP）作為外源蛋白可能在不同程度上引發機體的免疫應答，最終導致過敏反應或其他不良反應--例如發熱、水腫，甚至休克等同時人體的免疫應答性質和效果，會受到HCP濃度，數量和個體免疫系統差異而不同，藥物監管部門最關注用藥者的安全性，所以HCP的監控檢測變得越來越重要。

· 《中華人民共和國藥典》明確規定，CHO細胞殘余蛋白占總蛋白含量要小于0.05%以下才符合規定。

· 美國FDA規定，用一種靈敏度較高的方法檢測藥品中的HCP，其含量應該低于檢測限（通常小于100ppm）

三、殘留HCP的檢測方法

·SDS-PAGE

·2D電泳

·蛋白質印記（western blot）

·酶聯免疫吸附實驗（ELISA）

·高效液相層析（HPLC）

四、基于Sapphire的殘留HCP檢測

首先采用2D 雙向電泳技術高校分離HCP，一塊膠跑宿主細胞全蛋白2D電泳，之后染色使用sapphire儀器進行掃描成像，另一塊膠跑生物制品的2D電泳，然后將膠上蛋白轉移至膜上，經過封閉，一抗，熒光二抗雜交，使用sapphire進行western blot熒光信號采集，通過結合2D 電泳和wesern blot結果比對鑒定，相比傳統的單獨的ELISA和WB方法，2D 電泳和WB技術能夠更為全面精準的鑒定微量的HCP

五、應用領域

檢測疫苗等蛋白藥物中殘余的HCP類別和殘留水平

檢測重組蛋白中殘余的HCP類別和殘留水平

鑒定抗體產物中殘余的HCP類別和殘留水平