為什么要使用多重熒光方法進行western blot的檢測？

最近關于western blot數據造假的學術新聞成了科研的熱搜詞條，其數據造假包括，均存在一圖多用，用了剪切，拼接，翻轉，旋轉，調整大小，故意抹平背景等P圖手法，那我們來看看這些造假的數據。

一、一圖兩用——用同一條帶，P圖后代表不同實驗結果。

兩個不同實驗，同一條帶代表不同蛋白（GST-IkBa和Caspase）

《鋅指蛋白A20對氧化性低密度脂蛋白介導的巨噬細胞與血管平滑肌細胞增殖和凋亡的影響及其分子機制的研究》，2005年6月

二、抹平背景

為了達到預期的實驗效果，故意調整對比度，將不要的條帶抹去。

Kagami, A. et al. Acetylation regulates monopolar attachment at multiple levels during meiosis I in fission yeast. EMBO Rep. 12, 1189–1195 (2011).

三、拼圖粘貼

ABCD變成了ACBD

--Metformin inhibits cell proliferation, migration and invasion by attenuating CSC function mediated by deregulating miRNAs in pancreatic cancer cells.Cancer Prevention Research (2012）

四、一組對照多次使用

像GAPDH、β-actin這些基本都是陽性的結果，所以有時候有些小伙伴就圖省事兒，做一次GAPDH、β-actin的WB圖，可以用一陣子，發幾篇文章了，有時候調調亮度，有時候增加以下對比度，有的時候鏡像反轉一下。

--Increased Ras GTPase activity is regulated by miRNAs that can be attenuated by CDF treatment in pancreatic cancer cells.Cancer Letters (2012)

那么我們如何遏制這樣造假數據的發生的，最好的辦法是選擇合適合理的檢測方法和提供真實的圖片信息。

A、z驗人員應該采用現在動態范圍更寬的多重熒光western blot檢測方法來進行western blot檢測，多重熒光檢測二抗使用熒光基團標記，膜上的靶標蛋白濃度與熒光信號強度呈線性關系，實現真正的定量要求，無需玻剝離膜和二次孵育，進行上樣質控，目標蛋白和內參蛋白在同一張膜上，就不會發生上面數據造假的情況發生。

• 成像儀器要提供給客戶真實的原始的tiff圖片，而不是經過軟件自行修改，編輯的看著好看的圖片，例如插值圖片，插值圖像灰度值有明顯的不連續性，圖像質量損失較大，會產生明顯的馬賽克和鋸齒現象。自動優化圖片，軟件類似PS的手法，在形成圖像時進行自動優化，消除背景等方法，這樣會使圖片丟失大量信息，影響數據的真實性。
• Azure公司秉承實事求是，尊重科研的態度，我們提供給客戶最原始的16bit的tiff圖片，tiff是最復雜的一種位圖文件格式。tiff是基于標記的文件格式，它廣泛地應用于對圖像質量要求較高的圖像的存儲與轉換。由于它的結構靈活和包容性大，它已成為圖像文件格式的一種標準。信息量大，真實反映實驗結果。

綜上所述，要選擇合適的western blot檢測方法、好的成像檢測器和一顆端正的學術心，才能做好科研，不會有類似的事件發生。

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