認識熒光顯微鏡的光立方

什么是熒光？

熒光即為物質中的電子吸收光的能量由低能狀態轉變為高能狀態，再回到低能狀態時釋放出的光，是非溫度輻射光——冷光。即：物質吸收短波光，進入激發態, 發射出的長波光。

無論是物質的自發熒光、熒光染料還是融合表達的熒光蛋白，均需經過特定波長的光激發（激發光Excitation），電子發生遷移后，能量損失后，發出特定長波長的光（發射光Emision），可通過檢測系統采集，達到識別特定熒光的作用。

什么是熒光光立方？

在熒光顯微鏡觀察和成像中，通過熒光光立方提供特定波長的激發光和對應的長波長發射光，從而通過肉眼、顯示屏或相機采集熒光信號，因此，熒光光立方是決定可以檢測到何種熒光信號的關鍵器件，其特性包含EX：激發波長濾光片參數，EM：發射波長濾光片參數和DM：二分鏡參數。以Revolve正倒置一體熒光顯微鏡的DAPI光立方為例，EX：385/30，EM：450/50，DM：425。

光源發出的光經過DAPI EX，得到特定波長范圍的激發光，即得到385±15nm的光，特異性地激發在此范圍內才能被激發的熒光物質；DM二分鏡是將激發光與熒光分離的光學元件，作為特殊的反射鏡，只反射特定波長的光，允許所有其它波長通過，因此只有>425nm的光能被傳輸到EM；EM發射濾光片是將熒光基團發出的熒光與其它背景光分離開來的光學元件。發射濾光片通過二向色鏡傳輸熒光波長的光，同時阻擋從激發光源(從樣品或光學元件反射)泄漏的所有其它光。發射光波長大于EM才能被觀察到，即只有450±25nm范圍內的光進入檢測系統。選擇適當的EX，EM濾光片和DM二分鏡能夠幫助研究人員獲得更高的信噪比（S / N）。

Excitation filter (EX)——激發濾光片工作示意：

Dichroic mirror (DM)二分鏡工作示意：

Emission (EM) filters發射濾光片工作示意：

Revolve正倒置一體熒光顯微鏡提供6種光立方選擇和個性化定制服務，而且通過iPad Pro和Echo app實現完全自動化切換，光源為高能LED，壽命長，光漂白小，且無汞污染風險，濾光片均為Chroma®噴鍍膜濾光片，具有超高透光率，6種光立方的光學特性如下：

Revolve提供多達4個EPI熒光通道和1個透射光通道，可以實現5個通道圖像的自動疊加，且在疊加的圖像上，依然可以對各個通道的圖像進行調整，為科學家研究提供了極大的方便性。