汽化過氧化氫對含有蟯蟲污染的動物籠具的消毒研究

實驗室的嚙齒動物經(jīng)常被檢測到有蟯蟲感染^（1）。將感染了蟯蟲的實驗動物用于科學(xué)實驗，這不僅干擾影響了科學(xué)實驗的結(jié)論正確性，降低科研的科學(xué)性、準確性及穩(wěn)定性，而且還可能威脅研究人員的健康。

蟯蟲發(fā)展有直接的生命周期，一般需要7~15天完成卵到成蟲的變化。成蟲主要在盲腸中發(fā)現(xiàn)。通過攝取雌蟲在宿主肛門周邊儲存的卵子可以發(fā)現(xiàn)蟯蟲感染的傳播是水平性的，即主要通過粘膜傳播。蟯蟲卵在小腸內(nèi)釋放與孵化大約6小時之后，開始變得具有傳染性。幼蟲以內(nèi)腔中的細菌為食，經(jīng)過7~11天之后它們在盲腸中成熟。一只雌蟲大約會釋放450~550個卵^（2）。這些卵具有頑強生命力，并很容易擴散，形成廣泛的污染。它們在室溫下可以存活很長時間，使用普通消毒劑很難消除^（3）。

本文研究試圖探討過氧化氫蒸汽熏蒸法是否能成功殺滅污染了動物籠具的蟯蟲卵。

動物與實驗設(shè)計

實驗分為3組進行，每組重復(fù)三次。每次有5只雄性、4周齡大的SCID小鼠。所有實驗動物均為干凈動物，無體內(nèi)寄生蟲。將它們暴露在被蟯蟲污染過的鼠墊料籠子上，置于通風(fēng)架，在無菌條件下飼養(yǎng)。在把實驗動物放置這些臟籠子之前，這些臟籠子被以三種方式先進行處理：

    1、  測試組：在30℃的室溫下使用過氧化氫熏蒸15分鐘；

    2、  陰性對照組：在121℃的高溫下，高壓消毒20分鐘；

    3、  陽性對照組：無任何處理。

實驗動物接觸臟籠子兩周后，將所有動物轉(zhuǎn)移回干凈的籠子。接著經(jīng)過四周后，采取肛門膠紙粘試法測試；并再過兩周后殺死所有動物，對它們進行直接的盲腸檢查。

感染的檢測

①  肛門膠紙粘試法：使用20*30mm的干凈膠帶條粘拭所有動物的肛門周圍皮膚，然后貼在載玻片上，使用顯微鏡放大100倍檢測卵子。

②  蟯蟲直接檢測法：解剖動物尸體，取盲腸內(nèi)容物置于裝有溫生理鹽水的培養(yǎng)皿中，再使用解剖顯微鏡進行10~20倍的放大倍數(shù)檢查。

1、  汽化過氧化氫熏蒸后的墊料組：重復(fù)三次均未發(fā)現(xiàn)實驗鼠感染蟯蟲；

2、  高溫高壓滅菌后的墊料組：重復(fù)三次均未發(fā)現(xiàn)實驗鼠感染蟯蟲；

3、  未經(jīng)任何處理的墊料組：重復(fù)三次均發(fā)現(xiàn)實驗鼠感染蟯蟲。

討論

研究背景與目的

對蟯蟲感染的鼠繁殖群，未經(jīng)環(huán)境消毒的情況下，用兩種不同的伊維菌素治療方案均未能消除鼠蟯蟲。文獻有爭議性地討論了環(huán)境消毒的必要性^（2,5）。進一步說，關(guān)于對環(huán)境中嚙齒動物蟯蟲卵的生存以及它們對普通生理鹽水的敏感性的研究數(shù)據(jù)非常有限^（2）。本研究的目的是為了了解過氧化氫熏蒸法能否成功殺滅蟯蟲卵，并結(jié)合抗菌治療研究能否消除大鼠體內(nèi)的寄生蟯蟲。

研究設(shè)計

在初步實驗中,成熟雌性蟲子宮內(nèi)的卵在經(jīng)過15分鐘的過氧化氫熏蒸后被完全破壞。然而，肛周膠紙粘試法顯示成熟的卵沒有這種被破壞效果，測試顯示成熟卵未有明顯的微觀病變，可能是由于成熟卵的殼太厚并更有抵抗力。因此，研究決定用高度敏感的SCID小鼠作為生物測試模型進行體內(nèi)感染實驗檢測。在一個成功的實驗里，這些動物如果置放在未經(jīng)處理的污染墊料上，應(yīng)該都要被感染（陽性對照組）。經(jīng)過過氧化氫熏蒸（測試組）或高溫高壓消毒（陰性測試組）的墊料上的所有老鼠應(yīng)該保持干凈狀態(tài)。根據(jù)文獻，感染了蟯蟲的大鼠有一個短暫的潛伏期，約7~8天^（6）。在本研究中，為了避免假陰性結(jié)果的發(fā)生，實驗延長了揭露時間與觀察時間（2周+6周），確保所有動物受感染有充足的時間范圍。

方法細節(jié)

我們的實驗使用了小型的高壓艙進行熏蒸。由于艙體相對較小，滅菌過程相對加快。此外，更容易獲得高濃度的過氧化氫接觸。由于蟯蟲卵對普通的消毒劑具有很強的抵抗力，我們選擇了相對高濃度的過氧化氫。在殺菌階段，總共注入了75g 30%濃度的過氧化氫溶液。這相當(dāng)于每立方米有27.57g過氧化氫溶液或8.27g純的過氧化氫。相對于之前用于動物房的消毒，這次的過氧化氫濃度約有兩倍^（7）。這些積極的結(jié)果使得可以開始大規(guī)模的實驗測試。希望將來能有更詳細的研究精確定義過氧化氫使蟯蟲卵失活的劑量依賴性。

結(jié)論

本文的研究明確證明了使用過氧化氫熏蒸能完全使蟯蟲卵對易受宿主失去感染力。本實驗方法可推薦用于有效消除蟯蟲污染的動物籠具，同時可用于熱敏性設(shè)備的清潔比如通風(fēng)架、鼓風(fēng)機、凈化工作臺，以及其他電子設(shè)備（電腦、天平稱、行為測試設(shè)備）。

參考文獻：

(1)Jacoby,R.andJ.R.Lindsey(1988):ILARJ.39:266-271.             (2)Pritchett,K.R.andN.A.Johnston(2002):Contemp.Top.Lab.Anim.41:36-46.

(3)Suckow.M.A.etal.(2001):The laboratory mouse.CRC Press,80-82.

(4)Krause,J.and H.Riedesel(2002):Lab.Anim.(submitted).

(5)Huerkamp.MJ.etal(2000):Contemp.Top.Lab.Anim.34:76-83.

(6)Lewis.J.W.andJ.D’Silva(1986):J.Helminthol.60:39-46.

(7)KrauseJ.etal(2001):Contemp.Top.Lab.Anim.40:18-21.