如何防止高效（HPLC）或毛細管（CapLC)液相色譜的污染
如何防止高效液相色譜（HPLC）或毛細管液相色譜（CapLC）的污染
最小化或者減少背景污染物的建議：所有的溶劑和酸、堿、緩沖鹽都是化學品，沒有一種是100%純的。因此，在LC/MS中總是存在著一些化學背景。為了改善數據質量，將干擾以及背景噪音減少到最小是非常值得考慮的。在此我們給大家提出一些小建議，供大家參考。
1. 溶劑和添加劑
a. 使用最高純度的試劑 – HPLC 級或更高純度。
i.最好使用Fisher Optima grade
1.有些 HPLC 級試劑含有聚乙二醇類（PEG）化合物，紫外檢測器無法檢測它們的存在。
2.有些HPLC級試劑含有鐵離子 (Fe+3)
ii.水可能是污染物的一個主要來源
3.必須對在線的純水系統(Milli-Q)進行維護。18 M歐姆的水也不是完全沒有有機污染物的。
4.瓶裝水不一定比Milli-Q制得的水更好，因為在瓶裝水開啟以后，它可能會積聚污染物。
5.不推薦在塑料容器內儲存水。
6.將水通過一根干凈的C18色譜柱以除去有機物質而進一步純化，這可以通過一個高壓二元梯度和一根C18的保護柱而在線進行。
b. 添加劑，例如乙酸可能含有大量的鐵。100ppb聽起來似乎是很低的濃度，可是，100ppb＝100ng/L或者100pg/mL。
i.乙酸所形成鐵的加合物會導致強的ESI+ 質譜圖。
ii.甲酸已被證明含有較少的鐵離子。
c. 加入最低濃度的添加劑，可以減少化學背景噪音、增加信噪比和靈敏度。
2. 裝樣品和溶劑的容器
a. 瓶子和蓋子，樣品提取板：
i.Waters 樣品瓶是經過質量控制的， 其他品牌可能沒那么潔凈。
ii.帶墊片的樣品瓶蓋，因含有塑膠或者粘合劑，可能會污染自動進樣器。
iii.樣品提取板是塑料材質的，可能有增塑劑釋出 (例如鄰苯二甲酸二辛酯污染物)。
iv.樣品提取板膠合金屬箔片的蓋子可能會有粘合劑物質流失。
b. 玻璃器皿
i.用普通的洗滌劑洗滌后，玻璃器皿上可能有洗滌劑殘留(聚乙二醇類化合物) 及其它 “粘性的” 物質污染。
ii.應該用即將使用的流動相品質的試劑進行沖洗。
c. 塑料容器或管路:
不要將溶劑或者水儲存于塑料的溶器中 (因為其中會如鄰苯二甲酸二辛酯污染物)。
3.護手霜
a.含聚乙二醇類化合物、油脂、維生素等等。
b.在處理能夠接觸流動相或者樣品的HPLC部件時，請戴手套。
4.樣品以及樣品基質
a. 樣品基質中可能含有鹽和其它不期望帶入的物質。當制備針頭清洗液的時候，必須考慮基質的溶解性。
i.無機鹽類在高有機相比例的溶液中是不溶解的，避免使用含有Na+、K+ 、PO4-3的緩沖液，因為它們是不揮發的。含NH4+ 的醋酸鹽或者甲酸的緩沖液具有揮發性，并且是與MS兼容的。
ii.蛋白質 (例如組織，血液或者血清樣品中的) 在高有機相溶液中(>40%)會沉淀，沉淀的蛋白質會阻塞進樣器和管路，而且會吸附待測物或者污染物。
b. 制備樣品所用的化學品(例如：洗滌劑、鹽) 等會產生出巨大的不希望出現的離子。樣品凈化富集的方式需要與LC/MS相協調。
c. 待測物的溶解度可能是一個問題。如果樣品在高有機相溶液中不溶解，在被注入初始的低有機溶劑的流動相中，一些待測物可能會在流動相中析出，并污染進樣器或色譜柱，然后當下一個梯度進行時，它們可能會再溶解。
d. 在進樣時濃度非常大的樣品可能會污染進樣器。在查看樣品中0.1%水平的雜質時，因需要注入足夠多的樣品來查看，這樣的情形就很可能發生。
5.色譜柱
a. 色譜柱可以表現得如同一個過濾器，顆粒、沉淀的蛋白質、及諸如此類的物質都會停留在色譜柱頭并慢慢地被沖洗下來，這就會逐漸增加背景離子。
b. C18 分析柱或者Traping去鹽柱將捕獲來自水的疏水性化合物并會慢慢地富集它們。
i.被富集的化合物洗脫時可能作為一個明顯的峰或者貫穿色譜圖的以類似拖尾的形式出現。
ii.痕量富集會導致來自于溶劑或者HPLC系統的污染物的量增大。
iii.長時間的平衡C18色譜柱將富集更多的污染物。
iv.以低有機相濃度的等度流動相長時間沖洗色譜柱也會富集污染物。色譜柱應該用高有機相的溶液進行周期性的清洗。
6.PEEK 管路以及石英毛細管管路
a.PEEK 是一種塑料的聚合物。很多疏水性的化合物 (如類固醇) 可能吸附在上面，而當它們洗脫下來時，會形成污染物。
b. 石英毛細管路具有活性離子的表面，某些物質（例如一些蛋白質以及多肽）會粘附到石英上。那些能夠粘附在玻璃表面的物質將都會粘附在石英毛細管上。當它們被洗脫下來時，它們將形成污染物。
7.HPLC 系統 – 在使用前，應進行清洗并測試污染物。
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