使用超高效合相色譜進行脂溶性維生素膠囊分析
Andrew Aubin
沃特世公司(美國馬薩諸塞州米爾福德)
應用效益
■ 各種脂溶性維生素配方的快速分析。
■ Waters® ACQUITY UPC2™系統可成功地分析六種不同配方的脂溶性維生素。一種技術能夠快速分析這些不同配方。
■ 該系統通過讓實驗室在一個系統上，使用一種技術來分析各種FSV配方，從而簡化脂溶性維生素分析。
■ 每種脂溶性維生素配方都可以得到快速的分析，目標成分可很好地從賦形劑材料中解析出來。
■ 維生素A、E和K1同分異構體被成功地分析、分離。
■ 各種脂溶性維生素配方的快速分析。
■ Waters® ACQUITY UPC2™系統可成功地分析六種不同配方的脂溶性維生素。一種技術能夠快速分析這些不同配方。
■ 該系統通過讓實驗室在一個系統上，使用一種技術來分析各種FSV配方，從而簡化脂溶性維生素分析。
■ 每種脂溶性維生素配方都可以得到快速的分析，目標成分可很好地從賦形劑材料中解析出來。
■ 維生素A、E和K1同分異構體被成功地分析、分離。
沃特世解決方案
ACQUITY UPC2系統
ACQUITY UPC2色譜柱工具包
Empower™ 3軟件
ACQUITY UPC2 PDA檢測器
ACQUITY UPC2系統
ACQUITY UPC2色譜柱工具包
Empower™ 3軟件
ACQUITY UPC2 PDA檢測器
關鍵詞
UPC2，脂溶性維生素，維生素E，維生素A，維生素D3，維生素K1，維生素K2
UPC2，脂溶性維生素，維生素E，維生素A，維生素D3，維生素K1，維生素K2
簡介
脂溶性維生素(FSV)(通常來自充油膠囊、充粉膠囊或壓縮片粒)的分析是一項具有挑戰性的任務。最常見的情況是，這些配方的分析都采用正相色譜法，使用傳統的正相溶劑(己烷、叔丁醇、乙酸乙酯、二氯甲烷等)，采購和處理的成本相當高。用于FSV分析的其它分析色譜技術包括反相液相色譜法、氣相色譜法、薄層色譜法和比色技術。超高效合相色譜(UPC2™)為脂溶性維生素分析提供了一種可行的技術，它是一種具備成本效益的、可持續的和綠色環保的替代技術，降低了有機溶劑的用量，分析時間快，保持了色譜數據的品質。使用
ACQUITY UPC2系統分析了一系列FSV配方。被檢驗的配方有：維生素A、維生素A+D3、維生素E，維生素D3、維生素K1和維生素K2，如表1所示。這些實驗的結果表明，UPC2有可能替代當今正在使用的許多分離方法成為唯一的一種技術。
脂溶性維生素(FSV)(通常來自充油膠囊、充粉膠囊或壓縮片粒)的分析是一項具有挑戰性的任務。最常見的情況是，這些配方的分析都采用正相色譜法，使用傳統的正相溶劑(己烷、叔丁醇、乙酸乙酯、二氯甲烷等)，采購和處理的成本相當高。用于FSV分析的其它分析色譜技術包括反相液相色譜法、氣相色譜法、薄層色譜法和比色技術。超高效合相色譜(UPC2™)為脂溶性維生素分析提供了一種可行的技術，它是一種具備成本效益的、可持續的和綠色環保的替代技術，降低了有機溶劑的用量，分析時間快，保持了色譜數據的品質。使用
ACQUITY UPC2系統分析了一系列FSV配方。被檢驗的配方有：維生素A、維生素A+D3、維生素E，維生素D3、維生素K1和維生素K2，如表1所示。這些實驗的結果表明，UPC2有可能替代當今正在使用的許多分離方法成為唯一的一種技術。
實驗
系統： ACQUITY UPC2包括：二元溶劑管理器、樣品管理器
合相管理器、色譜柱管理器、PDA檢測器
色譜柱： ACQUITY UPC2 BEH，
3.0 x 100mm，1.7μm
ACQUITY UPC2 HSS C18 SB，
3.0x 100mm毫米，1.8μm
ACQUITY UPC2 HSS C18 SB，
2.1 x 150mm，1.8μm
數據系統： Empower 3軟件
分離方法： 每種分離方法的詳細介紹包含在本應用文集的單個結果和討論部分中。
系統： ACQUITY UPC2包括：二元溶劑管理器、樣品管理器
合相管理器、色譜柱管理器、PDA檢測器
色譜柱： ACQUITY UPC2 BEH，
3.0 x 100mm，1.7μm
ACQUITY UPC2 HSS C18 SB，
3.0x 100mm毫米，1.8μm
ACQUITY UPC2 HSS C18 SB，
2.1 x 150mm，1.8μm
數據系統： Empower 3軟件
分離方法： 每種分離方法的詳細介紹包含在本應用文集的單個結果和討論部分中。
樣本制備
充油膠囊(維生素A、A + D3、D3)——去除四種膠囊的外殼并分別溶解于10毫升的異辛烷中，無需進一步前處理。去除單個維生素E膠囊的外殼并溶解于10毫升的異辛烷中，無需進一步預處理。
充油膠囊(維生素A、A + D3、D3)——去除四種膠囊的外殼并分別溶解于10毫升的異辛烷中，無需進一步前處理。去除單個維生素E膠囊的外殼并溶解于10毫升的異辛烷中，無需進一步預處理。
用異辛烷對八片碾碎的維生素K1片進行超聲處理30分鐘。沉淀后，將一小份萃取液通過一個1.0μm玻璃纖維過濾器直接過濾到樣品瓶中。
去除八粒充粉維生素K2的外殼，并用異辛烷進行超聲處理30分鐘。沉淀后，將一小份萃取液通過一個1.0μm玻璃纖維過濾器直接過濾到樣品瓶中。
結果與討論
維生素 A
該維生素A的配方為源于魚肝油，含豆油、明膠、甘油和水等活性成分。如圖1所示，維生素A棕櫚酸酯的兩種主要形式(順式和反式異構體，分別為1.325分鐘和1.394分鐘)和賦形劑的小峰得以完全分離，并標示于圖中，洗脫范圍為2.0分鐘至2.5分鐘。該分離采用梯度模式，二氧化碳和甲醇(含0.2%甲酸)在3min內從97:3變化到90:10，主動背壓調節器(ABPR)壓力為2176 psi，詳細的參數如表2所示。使用該分離方法，維生素A乙酸酯、棕櫚酸酯和視黃醇被輕易分離，如圖2所示。
維生素 A
該維生素A的配方為源于魚肝油，含豆油、明膠、甘油和水等活性成分。如圖1所示，維生素A棕櫚酸酯的兩種主要形式(順式和反式異構體，分別為1.325分鐘和1.394分鐘)和賦形劑的小峰得以完全分離，并標示于圖中，洗脫范圍為2.0分鐘至2.5分鐘。該分離采用梯度模式，二氧化碳和甲醇(含0.2%甲酸)在3min內從97:3變化到90:10，主動背壓調節器(ABPR)壓力為2176 psi，詳細的參數如表2所示。使用該分離方法，維生素A乙酸酯、棕櫚酸酯和視黃醇被輕易分離，如圖2所示。
維生素A + D3
與前例相似，維生素A+D的配方為：源于魚肝油，含豆油、明膠、甘油和水等活性成分。同樣，兩種形式的維生素A棕櫚酸酯(順式和反式異構體，分別為2.626分鐘和2.851分鐘)在賦形劑峰之前出峰。為了將維生素D3(VD3，6.862分鐘)從主要賦形劑和配方中所含的其它化合物中完全分離出來(如圖3所示)，需要使用更長的色譜柱來提供足夠的分離效率，才能完成該目標。系統具有足夠的靈敏度，可輕松地檢測到維生素D3的峰，如圖3所示。
與前例相似，維生素A+D的配方為：源于魚肝油，含豆油、明膠、甘油和水等活性成分。同樣，兩種形式的維生素A棕櫚酸酯(順式和反式異構體，分別為2.626分鐘和2.851分鐘)在賦形劑峰之前出峰。為了將維生素D3(VD3，6.862分鐘)從主要賦形劑和配方中所含的其它化合物中完全分離出來(如圖3所示)，需要使用更長的色譜柱來提供足夠的分離效率，才能完成該目標。系統具有足夠的靈敏度，可輕松地檢測到維生素D3的峰，如圖3所示。
該分離采用二氧化碳和甲醇(含0.2%甲酸)進行梯度洗脫，按99:1到90:10的比例在10分鐘內完成，詳細信息如表3所示
維生素D3
使用與維生素A+D3相同的分離條件(如表3所示)，維生素D3(膽鈣化醇，6.867分鐘)被輕松地從膠囊賦形劑材料(標記為主要成分為葵花籽油)中分離出來，如圖4和表3所示。
使用與維生素A+D3相同的分離條件(如表3所示)，維生素D3(膽鈣化醇，6.867分鐘)被輕松地從膠囊賦形劑材料(標記為主要成分為葵花籽油)中分離出來，如圖4和表3所示。
維生素 E
針對維生素E膠囊開發出一種非常快速的梯度分析法(運行時間約90秒)，可輕松地將4種生育酚異構體(α、β 、γ、δ-VE)基線分離。該分離方法采用梯度洗脫，二氧化碳和甲醇按98:2至95:5的比例在1.5分鐘完成，詳細信息如表4所示。
針對維生素E膠囊開發出一種非常快速的梯度分析法(運行時間約90秒)，可輕松地將4種生育酚異構體(α、β 、γ、δ-VE)基線分離。該分離方法采用梯度洗脫，二氧化碳和甲醇按98:2至95:5的比例在1.5分鐘完成，詳細信息如表4所示。
維生素 K1
采用簡單的等度方法，包含99%二氧化碳和1%的甲醇⁄乙腈(1:1)，維生素K1片中的兩個峰得到完全的基線分離(Rs > 2.0)，如圖6所示。兩個峰的紫外光譜(紫外光位于246 nm通道時同時收集)是相似的，如圖7所示，表明這兩個峰是相關的。盡管沒有得到確認(分析的時候沒有每種異構體的單一標準品)，這兩個峰很可能是葉綠醌(維生素K1)的立體異構體，詳細信息如表5所示。
采用簡單的等度方法，包含99%二氧化碳和1%的甲醇⁄乙腈(1:1)，維生素K1片中的兩個峰得到完全的基線分離(Rs > 2.0)，如圖6所示。兩個峰的紫外光譜(紫外光位于246 nm通道時同時收集)是相似的，如圖7所示，表明這兩個峰是相關的。盡管沒有得到確認(分析的時候沒有每種異構體的單一標準品)，這兩個峰很可能是葉綠醌(維生素K1)的立體異構體，詳細信息如表5所示。
維生素 K2
維生素K2由甲基萘醌(menaquinone，MK)組成，形式從MK-3到MK-14。不同形式的維生素K2的側鏈長度由可變數量的非飽和異戊二烯單元構成。該片劑配方顯示了一個主峰和多個較小的峰(如圖8所示)，采用95:5二氧化碳:甲醇的等度分離法，被鑒定為MK-7(數據無顯示)。這一結果與膠囊標簽上的說明是一致的，即：該配方應該主要含有MK-7。詳情的分離方法如表6所示。
維生素K2由甲基萘醌(menaquinone，MK)組成，形式從MK-3到MK-14。不同形式的維生素K2的側鏈長度由可變數量的非飽和異戊二烯單元構成。該片劑配方顯示了一個主峰和多個較小的峰(如圖8所示)，采用95:5二氧化碳:甲醇的等度分離法，被鑒定為MK-7(數據無顯示)。這一結果與膠囊標簽上的說明是一致的，即：該配方應該主要含有MK-7。詳情的分離方法如表6所示。
結論
■ 沃特世的ACQUITY UPC2系統可成功地分析六種不同配方的脂溶性維生素。
■ 每種FSV配方都可以得到快速的分析，目標成分可很好地從賦形劑材料中分離出來。
■ 維生素A、E和K1的同分異構體被成功地彼此分離。
■ 該系統通過讓實驗室在一個系統上使用一種技術來分析各種FSV配方，從而極大地簡化了FSV分析。
■ 沃特世的ACQUITY UPC2系統可成功地分析六種不同配方的脂溶性維生素。
■ 每種FSV配方都可以得到快速的分析，目標成分可很好地從賦形劑材料中分離出來。
■ 維生素A、E和K1的同分異構體被成功地彼此分離。
■ 該系統通過讓實驗室在一個系統上使用一種技術來分析各種FSV配方，從而極大地簡化了FSV分析。
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