使用超高效合相色譜系統(tǒng)測定雌二醇(Estradiol)色譜純度

采用沃特世ACQUITY UPC²™系統(tǒng)對雌二醇進(jìn)行雜質(zhì)分析，能獲得和美國藥典(USP)方法相當(dāng)或者更好的結(jié)果。

 

目前，美國藥典(USP)檢測雌二醇(estradiol)色譜純度的方法使用4.6 x 250 mm的硅膠柱和含有2,2,4-三甲基戊烷、正丁基氯、甲醇45:4:1的流動相，流速2 mL/min。由于許多實(shí)驗(yàn)室都想限制脂肪烴和氯化物溶劑的使用，所以必須對替代性的色譜方法，如超臨界流體色譜(SFC)進(jìn)行評估。沃特世ACQUITY UPC²系統(tǒng)被用于開發(fā)測定雌二醇色譜純度的方法。Ultra Performance Convergence Chromatography™(UPC²™)得到的結(jié)果直接和由目前的美國藥典檢測雌二醇雜質(zhì)的方法對比。兩種方法檢測的結(jié)果相似，與美國藥典使用的正相HPLC方法相比，UPC²方法檢測雌二醇雜質(zhì)的靈敏度更高。此外，使用UPC²時，樣品的運(yùn)行時間大大縮短，每次分析的總成本也顯著降低(基于溶劑用量和廢液處理成本計(jì)算)。

 

 

使用現(xiàn)行美國藥典方法制備和分析雌二醇，如圖1所示。HPLC分析的結(jié)果同ACQUITY UPC²系統(tǒng)分析的結(jié)果(使用相同的樣品制備方法)進(jìn)行對比，如圖2所示。

色譜柱： ACQUITY UPC² BEH，2.1 x 150 mm，1.7 微米

流動相： A=CO₂ B=1:1甲醇/異丙醇

背壓： 130 bar/1880 psi

柱溫： 45 °C

檢測： UV /PDA，280 nm

 

兩種測試方法得到的結(jié)果對比見表1。正相HPLC方法和UPC²均檢出至少5種含量小于0.1%(按面積計(jì)算)雜質(zhì)。兩種方法在0.01%范圍內(nèi)峰的信噪比約為3:1，UPC²結(jié)果得到的值稍高。UPC²方法測得的最大雜質(zhì)(以面積計(jì)約0.05%)的信噪比為16:1，正相HPLC方法測得的為9:1。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果清晰地表明，ACQUITY UPC²系統(tǒng)可成功地用于分析雌二醇中的微量雜質(zhì)。UPC²方法的運(yùn)行時間明顯短于正相HPLC方法所用的時間(20min對比60min)，從而提高了實(shí)驗(yàn)室的生產(chǎn)率。對每次運(yùn)行的成本分析表明，正相HPLC的溶劑成本5.89美元，而使用UPC²，每次運(yùn)行的成本僅為0.05美元。正相HPLC方法所產(chǎn)生需要處理的混合氯化物廢液為108Ml2,2,4-三甲基戊烷、9.6mL正丁基氯和2.4mL甲醇。UPC²方法產(chǎn)生的需處理廢液為甲醇和異丙醇各0.60mL。分離中使用的CO₂通過實(shí)驗(yàn)室排氣管排出。使用UPC²方法，廢液處理成本降低了150倍之多。2,2,4-三甲基戊烷、9.6mL正丁基氯和2.4mL甲醇。UPC²方法產(chǎn)生的需處理廢液為甲醇和異丙醇各0.60mL。分離中使用的CO₂通過實(shí)驗(yàn)室排氣管排出。使用UPC²方法，廢液處理成本降低了150倍之多。