小鼠實(shí)驗(yàn)中他莫昔芬給藥的詳細(xì)操作指南及注意事項(xiàng)介紹

想不想像控制開關(guān)一樣，隨心所欲地在特定時(shí)間、特定組織里“打開”或“關(guān)閉”某個(gè)基因？CreERT2與Flox小鼠這對“黃金搭檔”就讓這變成了現(xiàn)實(shí)，它們已成為探索基因功能的標(biāo)配工具（原理可查看：小鼠大學(xué)問 | Cre-Lox系統(tǒng)核心原理全解析）。然而，理想很豐滿，現(xiàn)實(shí)卻常卡在第一步：當(dāng)你花費(fèi)數(shù)月培育出珍貴的實(shí)驗(yàn)小鼠，卻可能在他莫昔芬（Tamoxifen）溶解這一步就犯了難——后續(xù)的給藥劑量、頻率和方式，每一步都有不少萌新“翻車”。本期，小編就化身“通關(guān)指導(dǎo)員”，帶你搞定他莫昔芬給藥的那些事兒。

1 他莫昔芬的配置和儲存
他莫昔芬在水中的溶解度極低，常規(guī)操作中需使用玉米油作為溶劑進(jìn)行配制。建議將其配制為終濃度20mg/mL的溶液，并于37℃條件下振蕩過夜，以確保充分溶解或均勻懸浮。為提高配制成功率并維持體系穩(wěn)定性，單次配制體積建議控制在50mL以內(nèi)。配制完成后，應(yīng)將溶液分裝為1mL/管，并于-20℃、避光條件下保存。使用時(shí)需注意避免反復(fù)凍融，在規(guī)范存儲條件下，溶液可保存一個(gè)月，推薦現(xiàn)配現(xiàn)用以獲得最佳效果。

在整個(gè)配制和儲存過程中，必須嚴(yán)格進(jìn)行避光操作，因?yàn)樗�莫昔芬對光敏感，光照可能影響其穩(wěn)定性。以下為他莫昔芬和玉米油的常用品牌示例，僅供參考：
Tamoxifen(Sigma‐Aldrich)：CAS # 10540-29-1
玉米油 (Sigma‐Aldrich) CAS# 8001-30-7

2 他莫昔芬的給藥方式
他莫昔芬可以通過腹腔注射、灌胃、飲食或飲水等途徑給藥，應(yīng)用最廣泛的是腹腔注射給藥，腹腔注射的給藥劑量精準(zhǔn)，便于控制。

腹腔注射：正確抓取小鼠，將小鼠的鼻子朝向地面，露出腹部；定位動物的中線并將腹部分成四個(gè)象限，特別是動物的右下象限，是腹腔注射的合適位置（右下象限缺少重要的解剖結(jié)構(gòu)）；多次腹腔注射時(shí)，應(yīng)交替注射部位。

灌胃：給藥劑量和頻率與腹腔注射相同，在正式實(shí)驗(yàn)前，建議同學(xué)們先反復(fù)練習(xí)，熟練掌握灌胃給藥的技巧。

飲食/飲水給藥使用較少，主要是他莫昔芬水溶性差，小鼠的給藥劑量不好量化，且需要的誘導(dǎo)時(shí)間較長（一般需要幾周進(jìn)行誘導(dǎo)），在誘導(dǎo)期間往往還伴隨著小鼠體重的下降（約10-15%）。

3 他莫昔芬的給藥方式
對于4周齡級以上的成年小鼠，他莫昔芬的推薦劑量為75mg/kg-120mg/kg。一般注射3-5次，隔天一次。由于小鼠體內(nèi)各組織誘導(dǎo)效率有所差異，通常我們建議先以120mg/kg，注射5次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以盡可能保證敲除的效果。幼鼠注射劑量建議控制在100mg/kg以下；孕鼠及老齡鼠（大于6月齡）的劑量也需要適當(dāng)減少，具體參考如下^[1]：

*由于他莫昔芬會影響胎兒發(fā)育和生產(chǎn)，建議同時(shí)注射孕酮來減少流產(chǎn)概率。

4 其它注意事項(xiàng)

1. 他莫昔芬注射完成后不建議立刻開展實(shí)驗(yàn)，一般來講，停藥后需要繼續(xù)飼養(yǎng)7天，再安排后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2. 對照組小鼠需要同步進(jìn)行不含他莫昔芬的玉米油溶液給藥。
3. 未處理的小鼠需要和注射他莫昔芬的小鼠分籠飼養(yǎng)，小鼠舐舔到他莫昔芬懸液，梳毛等行為可能導(dǎo)致意外敲除。
4. 加熱不會導(dǎo)致他莫昔芬失效，37℃過夜溶解他莫昔芬是沒有問題的。

最后，需要特別強(qiáng)調(diào)的是，最佳的給藥方案（包括劑量、頻率和途徑）會受到實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、小鼠品系以及目標(biāo)組織器官等多種因素的綜合影響。因此，上文所述的方法僅為一般性參考框架，面對具體實(shí)驗(yàn)時(shí)，同學(xué)們還應(yīng)根據(jù)參考文獻(xiàn)、實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定最佳方案。

Reference：
[1] Feil S, Valtcheva N, Feil R. Inducible Cre mice. Methods Mol Biol. 2009;530:343-63. doi:10.1007/978-1-59745-471-1_18. PMID: 19266339.

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