RAYPA培養基自動制備應用案例：生活飲用水大腸埃希氏菌檢測

方案摘要：通過自動化精準控制培養基的特異性成分、滅菌條件和分裝精度，結合酶底物熒光技術或選擇性培養原理，實現從 “樣本接種 - 培養 - 結果判讀” 的全流程標準化。其核心價值在于利用設備的技術優勢，突破傳統手工操作的誤差瓶頸，為飲用水中埃希氏菌的快速、準確檢測提供可靠支撐，助力保障飲用水微生物安全。
 
方案詳情：
實驗原理基于總大腸菌群多管發酵法，當初發酵培養物呈陽性時，取菌液接種于含 β- 葡萄糖醛酸酶特異性熒光底物的培養基。由于大腸埃希氏菌可分泌β- 葡萄糖醛酸酶，該酶能催化熒光底物發生水解反應，生成具熒光活性的產物。通過紫外激發熒光檢測技術，觀察培養物是否產生特征性熒光，從而實現對水中大腸埃希氏菌的定性檢測。此方法利用目標菌的酶活性差異，將總大腸菌群的初篩與埃希氏菌的特異性鑒別相結合。
 
二、實驗準備
1、培養基和試劑
① EC-MUG培養基
 
2、儀器與設備
① 紫外燈：6W，波長為366nm。
② 培養箱。
③ 電子天平。
④ 平皿：直徑9CM。
⑤ 無菌試管：約15MM×160MM。
⑥ 錐形瓶：1000ML。
⑦ 小倒管。
⑧ 接種環。
⑨ RAYPA培養基自動制備分裝儀。
 
三、實驗步驟
1、接種：使用RAYPA培養基自動制備分裝儀，通過自動制備、高壓滅菌及自動分裝功能，將EC-MUG培養基分裝至試管中，然后用無菌接種環貨無菌棉簽將總大腸菌群多管發酵法在初發酵時產酸產氣的試管中液體接種到EC-MUG管中。實驗室生物安全要求應依據GB 19489。
 
2、培養：將已接種的EC-MUG管在培養箱中44.5℃±0.5℃培養24h±2h。
實驗數據處理    將培養后的EC-MUG管在暗處用紫外燈照射，如果有藍色熒光產生則表示水樣中含有大腸埃希氏菌。
   計算EC-MUG陽性的管數，查對應的MPN表得出大腸埃希氏菌的MPN值，結果以MPN/100ML報告。