Waters2695液相色譜儀操作流程詳細介紹及相關使用注意事項

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一、開機前的準備工作：
1．檢查設備電源、流路、信號連接是否完好；
2．流動相：配制相應的流動相，經0.22mm微孔濾膜抽真空過濾后，或檢查是否需要添加。適當選擇濾膜，水系/有機系（反光面朝上）。
3．樣品溶液：按方法取樣或配制標準樣品溶液，0.22mm濾膜過濾。

二、開機平衡系統：
1．開機自檢：打開電源開關，儀器開始自檢（4-5min），待屏幕上方出現“Idle”自檢完成。
2．脫氣：按面板右下方“Menu/Status”鍵進入“Status”界面，移動光標至“Degasser Mode”，按Enter選擇“On”，打開在線脫氣。一般默認是開的。
3．設定柱溫：在“Status”界面，光標至“Col Htr Set”，輸入目標溫按Enter。
4．清洗柱塞桿：按“Menu/Status”鍵回到“Menu”界面，按下排功能鍵“Diag”，然后再按下排功能鍵“Prime Seal Wsh”，“Start”，沖洗1~2min后，“HALT”，“CLOSE”。
5．Wet Prime：在“Status”界面中“Composition”下，選擇將用到的溶劑通道為“100%”，按液晶屏幕右下角“Direct Function”鍵，移動光標選擇“Wet Prime”，“OK”，流速及時間可使用默認值，也可自行設定（如：5ml/min，3min），“OK”即可。

將每一個會用到的溶劑通道按照上述操作一次。（也可各通道選25%v 5ml/min，3min）。

6．注射器排氣泡及清洗：進入“Direct Function”界面后，選擇“Purge Injector”，“OK”，默認數值為6，“OK”。
7．清洗注射針：進入“Diagnostics”界面，按下排功能鍵之“Prime Ndl Wsh”，“Start”，默認30秒鐘，“Close”，即可返回“Diagnostics”界面。

注：以上4-7為溶劑系統前處理過程，建議每天開機后依次進行。若發現注射器中有氣泡，則可重復6）直至排除。

8．平衡柱子：在“Status”界面上，按流動相比例設定各通道溶劑比例后，再Wet Prime操作一次，然后設置流速，平衡色譜柱30-60min。

三、編輯儀器方法和方法組:
1．打開電腦雙擊桌面上的Empower，輸入用戶名system、密碼manager選擇項目和系統。
2．新建方法與方法組

新建方法：單擊監視區方法組編輯向導—新建—2695的參數：單次輸送體積（建議130）、針頭深度0、脫氣設置開、泵模式（等度/梯度）、柱溫。2489配置：通用（燈開啟、波長）—文件—另存為（輸入方法名XX）-保存-退出。

新建方法組：選擇所需的方法名稱，點擊下一步—輸入方法組名（與方法名一致）。

四、進樣：
1．待“監視基線”穩定后，點擊“中斷樣品組”開關，進入“進樣”階段。
2．當進行單進樣時，在“運行樣品”的“單進樣”界面中輸入“樣品名”“功能”“方法組”“進樣體積”“運行時間”等；“單進樣”就是單次進樣，完成分析后即停止檢測（流動相正常走動）；
3．當多進樣時，在“運行樣品”的“樣品”界面點擊“樣品瓶”輸入所有樣品分別所在位置（輸入所在編號），“進樣體積”、“進樣數”、“功能”、“方法組”、“運行時間”等。
4．開啟綠色“運行”－“運行樣品”開關。

五、關機：
1．清洗注射器、針、柱塞桿：方法同開機平衡系統中的4-7。
如果流動相中含有鹽類，則實驗結束后必須用水清洗柱塞桿。

2．如果流動相使用了鹽，注意不要讓有機溶劑直接和緩沖鹽接觸，中間要使用水過渡一下。先用水/甲醇（或乙腈）=95/5在1ml/min流速下清洗色譜柱和系統30分鐘，再用甲醇或乙腈清洗30分鐘；如果流動相中沒有使用鹽，則用甲醇或乙腈清洗色譜柱和系統30分鐘。

3．降低流速至0，待系統壓力回零后，退出Empower軟件系統，關閉HPLC系統。最后，關閉計算機及顯示器電源。

六、儀器使用注意事項:
1．水性流動相使用不要超過二天，最好每天新鮮配制以免微生物的生長。
2．樣品組方法里的“功能”一項，有“平衡”及“平衡色譜柱”兩個選項，其功能不同。若儀器方法選用梯度，用“平衡色譜柱”可以在進樣前運行梯度來平衡柱子；而如果選用“平衡”則只是按照初始梯度條件等度平衡柱子。（當然，如果用等度的流動相條件，則兩者沒有區別）。
3．清洗柱塞桿的溶劑可以用水，或5%-10%甲醇（抑菌）。
4．清洗針的溶劑可以根據樣品溶解性選擇，如甲醇，或異丙醇-水（1：1）。
5．“實驗結束后要注射器排氣泡及清洗（purge injector）”，1次即可，包括了“purge sample loop”。
6．在線脫氣機打開后，開始時運行加速，壓力很快降到1.0psi以下，然后維持0.5psi左右。
7．懷疑管路堵塞可卸下單向閥和在線過濾器進行清洗。單向閥安裝注意方向（箭頭朝上）。
8．注射器中的氣泡快速有效排除方法：可以小心的卸下注射器抽吸甲醇排除氣泡后，注射器中保留少量溶劑，做“purge injector”小心安裝上，再做幾次“purge injector”觀察沒有氣泡即可。其他方法，可以在“purge injector”開始后、注射器桿向上時，擰掉下邊螺絲，上下抽推排除氣泡，但手動排泡過程要在purge injector結束前完成。溶劑用甲醇較好,不用同時擰掉上方注射器。
9．當有多個“儀器方法”和“方法組”存在時要注意選擇當前需要使用的“儀器方法”和“方法組”；當“儀器方法”改變時尤其是流動相組成等發生變化時，必須對系統重建平衡，也就是在新的“儀器方法”流動相條件下平衡系統30分鐘以上，使得基線重新穩定。
10．長期不使用HPLC，應該將色譜柱從系統拆除，拆除前應該充分平衡色譜柱，一般為用甲醇或乙腈沖洗色譜柱40分鐘以上。
11．若色譜柱長期保存未使用，則剛裝入HPLC系統時應以流量0.2mL/min平衡過夜（注意斷開檢測器避免不必要的檢測器耗損），然后再以0.8mL/min流量平衡30分鐘以上。以低流量緩慢的提高流速直到獲得穩定的基線，這樣可以保證色譜柱的使用壽命。當然在分析結束時沖洗色譜柱及系統后停止流量時也應該從高流量逐步過渡到低流量直到流量為0。
12．系統短期不使用，應該在每次使用后沖洗系統30分鐘以上。