一抗和二抗的種類和挑選合適的抗體需要考慮的因素

一 抗 選 擇 指 南

圖1一抗結構

一抗是能和對應抗原特異性結合的免疫球蛋白，種類包括單克隆抗體和多克隆抗體。檢測任何靶蛋白都有多種抗體可供選擇，一抗選擇主要考慮以下幾點因素：
 

（1）確定實驗樣本的種屬

首先確定所檢測樣本的種屬，如human、mouse、rat、dog、rabbit等。應該選擇反應種屬包含有樣本種屬的抗體。由于氨基酸序列同源性較高，抗體可能與不同物種的同種靶蛋白有交叉反應。如果樣本的種屬未列入抗體說明書上的反應種屬中，并不意味著該抗體不適用于檢測該物種的蛋白，而只是表示該物種尚未用此抗體驗證過。可以通過序列比對的方法來預測交叉反應，可應用Expasy和NCBI BLAST來進行不同物種蛋白同源性比對。如果比對結果證明同源性較高，也是可以考慮測試下。
 

（2）確定實驗類型

確定自己的實驗類型，如ELISA、WB、IHC、IP、FC等，選擇包含該應用的抗體。一般抗體說明書會列出該抗體經試驗驗證過的實驗類型，如未提及并不意味著該抗體不適用于該應用，而僅是說明尚未經過該應用的驗證，未包含應用的具體情況可向廠家咨詢。
 

（3）抗體宿主物種的選擇

一般建議樣本種屬與抗體宿主物種的親緣性越遠越好，不宜同源。對于免疫組化而言，如果使用未偶聯一抗和偶聯物標記二抗，盡可能選擇與樣本不同種系物種的一抗，從而避免二抗與樣本內源性免疫球蛋白產生交叉反應，例如：檢測小鼠樣本，則不應選擇小鼠或大鼠源的一抗，而是選兔源的一抗，二抗則可選擇偶聯了檢測分子（酶、熒光素、生物素等）的抗兔IgG。如果直接使用偶聯物標記一抗則不適用上述情況，對不含內源性免疫球蛋白樣本的檢測方法，則抗體宿主物種的影響不大。
 

（4）單克隆與多克隆的選擇

在抗體抗原反應中，一般單克隆抗體特異性強，但親和力相對較小，檢測靈敏度相對較低；而多克隆抗體特異性稍弱，但親和力較強，檢測靈敏度較高。如果使用多克隆抗體發現有很多無法去除的非特異條帶，建議換成單克隆抗體。
 

02一抗和二抗結合模式圖​

二抗是能和一抗結合的抗體，上面通常連有酶或熒光素等。二抗針對某一特定物種抗體均具有特異性，因而使用標記的二抗可以免去對每一個一抗進行標記，節省了時間和費用；此外，一個一抗分子可以同時結合幾個二抗分子，從而使信號增強，提高了實驗靈敏度。二抗可以偶聯有幾種不同的標記，可以是酶，熒光素，或生物素。

如何選擇二抗？通常情況下，某一特定的實驗中可能同時有幾種二抗可供選擇，如何能選擇到適合該實驗的二抗，需要綜合以下幾個方面進行考慮：
 

（1）一抗的物種來源

根據一抗的物種來源選擇相應的抗該物種的二抗。如果一抗是小鼠來源的抗體，二抗則選抗小鼠的二抗；如果一抗是兔來源抗體，則相應的二抗需要選擇抗兔的二抗。
 

（2）一抗的亞型   

一般來說多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應的二抗就是抗IgG抗體。而單克隆抗體則相對復雜些，具有多種亞型，二抗除了要與一抗的種屬來源相一致，還需與一抗的亞型相匹配。如一抗亞型為小鼠IgG2a，那邊二抗需要抗小鼠IgG2a。
 

（3）二抗的種屬來源

一般來說，不同的種屬來源的二抗在實驗里沒有太多的差別。然而在一些特殊的實驗里，如雙標實驗里，如果其中一個一抗是山羊來源的，一個是小鼠來源的，則相應的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的二抗，此時二抗就不能選山羊或者小鼠來源的。選擇相應的驢來源的二抗，就非常適合做類似雙標的免疫實驗。
 

（4）選擇哪種形式的二抗，是整個IgG分子，Fab片段，還是F(ab')2片段？

整個IgG分子：此種抗體適用于多數情況。

Fab片段：它們只有一個結合位點，一般用來封閉內源性免疫球蛋白。

F(ab')2片段：該種抗體是由兩個靠二硫鍵連接的用于結合抗原的Fab片段組成，這些抗體用在特定的情況中，如需要避免抗體與具有Fc受體的細胞結合的情況。
 

（5）二抗的偶聯標記

一般來講，偶聯到二抗上的探針主要有酶（辣根過氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP等），熒光基團（FITC, TR, PE）和生物素。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實驗。對于IHC, WB和ELISA，常用的二抗是酶標二抗，而細胞或組織的免疫熒光實驗和流式細胞術中通常使用熒光基團標記的二抗。
 

● 可提供兔多抗、鼠單抗10000余種，每年新增研發抗體近千種；

● 驗證應用：ELISA,WB,IHC,IF,IP等實驗；100余種標記二抗；

●  HRP、AP、Biotin、FITC、Alexa Fluor 488、CY3、熒光素等標記物。