Western Blot實(shí)驗(yàn)中各轉(zhuǎn)膜方法優(yōu)缺點(diǎn)分析

WB，蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)又稱免疫印跡(immunoblotting)，是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新的免疫生化技術(shù)，具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測(cè)定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。

轉(zhuǎn)膜（Transmembran）是將電泳后分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到固相載體（PVDF膜或NC膜）上的過(guò)程。通常有兩種方法，毛細(xì)管印跡法和電泳印跡法，常用的電泳印跡法有濕轉(zhuǎn)和半干轉(zhuǎn)兩種。兩者基本原理相同，只是在用于固定膠/膜疊層和施加電場(chǎng)的裝置不同。近些年，有些公司也推出了快速轉(zhuǎn)膜的儀器，有的也得到了一部分用戶的認(rèn)可。這些轉(zhuǎn)膜方法各有什么優(yōu)缺點(diǎn)，我們將從多方面分析一下。

濕轉(zhuǎn)
 

濕轉(zhuǎn)是將膠/膜疊層裝置浸入緩沖液中，在膠/膜疊層的兩側(cè)加電場(chǎng)，電流會(huì)從膠/膜疊層中穿過(guò)，使帶電的蛋白在電流的作用下轉(zhuǎn)移到膜上。電流除了從膠/膜疊層穿過(guò)，還可以從緩沖液的其他區(qū)域流過(guò)，加上膠/膜疊層的電阻也比其他區(qū)域的電阻大，大部分電流優(yōu)先從沒(méi)有膠/膜疊層區(qū)域的緩沖液中流過(guò)，也就是說(shuō)作用到膠/膜疊層的有效電流是很少的。再者，隨著轉(zhuǎn)膜時(shí)間的增加，緩沖液中的有效離子的濃度也會(huì)不斷地降低，表現(xiàn)為恒流轉(zhuǎn)膜時(shí)，電壓會(huì)不斷上升，恒壓轉(zhuǎn)膜時(shí)，電流會(huì)不斷降低。這就導(dǎo)致了濕轉(zhuǎn)的時(shí)間很長(zhǎng)，一般在1-2個(gè)小時(shí)，但是慢也導(dǎo)致了結(jié)果的均勻和穩(wěn)定。

半干轉(zhuǎn)

 
半干轉(zhuǎn)是用浸滿轉(zhuǎn)膜緩沖液的濾紙夾住膠/膜疊層裝置，組成三明治結(jié)構(gòu)，在這個(gè)三明治結(jié)構(gòu)的兩側(cè)加上電極，形成電場(chǎng)。這時(shí)電場(chǎng)只作用在三明治結(jié)構(gòu)上，因?yàn)槿�明治結(jié)構(gòu)周圍沒(méi)有緩沖液，所以電流不會(huì)側(cè)漏。幾乎所有的電流都經(jīng)過(guò)了膠/膜疊層，所以半干轉(zhuǎn)的效率很高，速度很快，一般在半小時(shí)以內(nèi)。但是，由于半干轉(zhuǎn)用到的緩沖液很少，只有兩側(cè)濾紙浸入的一些緩沖液，這就導(dǎo)致了半干轉(zhuǎn)緩沖液中有效離子的濃度衰減很快，可能幾分鐘后，它的有效離子已經(jīng)消耗殆盡，這時(shí)大分子量的蛋白還沒(méi)有完全轉(zhuǎn)到膜上，如果再增加轉(zhuǎn)膜時(shí)間也是無(wú)濟(jì)于事的。半干轉(zhuǎn)還有個(gè)問(wèn)題就是產(chǎn)熱，由于它沒(méi)有足夠的緩沖液來(lái)降溫，導(dǎo)致它的熱量很難散掉。

快速轉(zhuǎn)膜
近些年出現(xiàn)的快速轉(zhuǎn)膜基本上都是在轉(zhuǎn)膜試劑上做一些優(yōu)化，使轉(zhuǎn)膜時(shí)的電流增大；加大電壓或電流等策略來(lái)實(shí)現(xiàn)快速轉(zhuǎn)膜的目的，有的電流能達(dá)到1-2A。這種方法沒(méi)有從根本上解決上面濕轉(zhuǎn)和半干轉(zhuǎn)，電流側(cè)漏、有效離子濃度衰減，產(chǎn)熱等問(wèn)題，大電流還增加了燒膜的風(fēng)險(xiǎn)。

中科通儀M-Blot快速轉(zhuǎn)膜儀
 
 

中科通儀自主研發(fā)生產(chǎn)的專利產(chǎn)品M-Blot快速轉(zhuǎn)膜儀是濕轉(zhuǎn)和半干轉(zhuǎn)的結(jié)合，從根本上解決了傳統(tǒng)濕轉(zhuǎn)和半干轉(zhuǎn)的一些問(wèn)題。

M-Blot快速轉(zhuǎn)膜儀是在半干轉(zhuǎn)裝置的基礎(chǔ)上增加持續(xù)補(bǔ)充轉(zhuǎn)膜緩沖液的功能，使三明治結(jié)構(gòu)處于一個(gè)濕轉(zhuǎn)的環(huán)境中，這時(shí)它既有濕轉(zhuǎn)的均勻和穩(wěn)定，又有半干轉(zhuǎn)的效率。它有以下特點(diǎn)。
1.新 新型濕轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)膜過(guò)程中緩沖液每一秒都是新的，持續(xù)補(bǔ)充有效離子。
2.快 轉(zhuǎn)膜過(guò)程只需10-15分鐘。
3.省 節(jié)省試劑，單次只需100ml。
4.通 試劑開放，專用試劑效果更佳。
5.穩(wěn) 恒壓轉(zhuǎn)膜，電流也穩(wěn)定，高重現(xiàn)性。
6.冰 新緩沖液的補(bǔ)充同時(shí)也帶來(lái)了更低的溫度。
7.染 不止有轉(zhuǎn)膜，它還可以染色。
8.簡(jiǎn) 全觸屏操作，簡(jiǎn)單方便。
 
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