THUNDER技術(shù)成像案例集錦（三）

將計(jì)算清晰度與寬場顯微鏡的速度、熒光信號靈敏度和易用性相結(jié)合，實(shí)時(shí)解碼三維生物學(xué)*。

為了幫助您回答重要的科學(xué)問題，THUNDER技術(shù)消除了使用基于相機(jī)的熒光顯微鏡觀察厚樣品時(shí)產(chǎn)生的焦外模糊現(xiàn)象。THUNDER技術(shù)采用了我們?nèi)�新的光電�?shù)字技術(shù)--Computational Clearing。因此，可以對多種三維樣品（包括模式生物、組織切片和三維細(xì)胞培養(yǎng)物）進(jìn)行高速、高質(zhì)量成像。請看這些圖片，了解THUNDER技術(shù)是如何幫助研究人員揭示樣品深處最精細(xì)的結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)的。

當(dāng)您看到THUNDER技術(shù)實(shí)現(xiàn)的無霧圖像質(zhì)量后，請?jiān)L問我們的產(chǎn)品頁面了解更多信息。了解THUNDER技術(shù)如何將Computational Clearing與寬場顯微鏡的速度、熒光信號靈敏度和易用性相結(jié)合，從而實(shí)時(shí)解碼三維生物學(xué)*。（*符合 ISO/IEC 2382:2015 標(biāo)準(zhǔn)）

小鼠--THUNDER技術(shù)模式生物成像

在這只 E12-14 小鼠（wt 樣本）中，神經(jīng)絲被染成紅色，以評估神經(jīng)元的生長情況。該小鼠未進(jìn)行清除。法國 IGBMC 圖像中心 Yves Lutz 提供。

 

類器官--THUNDER技術(shù)-模式生物成像

直徑約 150 µm 的類器官，安裝在凹陷載玻片上。使用高分辨率物鏡（FluoCombi III）通過THUNDER技術(shù)模型生物成像。圖片由瑞士徠卡顯微系統(tǒng)公司的 Heinrich Bürgers 拍攝。

 

果蠅大腦

THUNDER技術(shù)- 3D活細(xì)胞成像

 

 

 

 

副纖毛蟲是一種單細(xì)胞纖毛微生物，常見于池塘等死水中。圖片由新加坡徠卡顯微系統(tǒng)公司的 Adam Cliffe 拍攝。

 

小鼠腎臟切片 - THUNDER技術(shù)-3D組織成像

小鼠腎臟切片，含 Alexa Fluor™ 488 WGA、Alexa Fluor™ 568 磷脂色素和 DAPI。樣品為美國馬薩諸塞州沃爾瑟姆市賽默飛世爾科技公司生產(chǎn)的 FluoCells™ 制備的 3 號載玻片。

 

小鼠腎臟切片 - THUNDER技術(shù)-3D組織成像

小鼠腎臟切片，含 Alexa Fluor™ 488 WGA、Alexa Fluor™ 568 磷脂色素和 DAPI。樣品為美國馬薩諸塞州沃爾瑟姆市賽默飛世爾科技公司生產(chǎn)的 FluoCells™ 制備的 3 號載玻片。

 

平滑肌 - THUNDER技術(shù)-模式生物成像

小鼠肺部 300 微米切片中血管周圍的平滑肌。1x 物鏡。

德國吉森大學(xué) Mario Boehm 博士提供

 

原代培養(yǎng)，大鼠

THUNDER Imager 3D 細(xì)胞培養(yǎng)儀

大鼠原代細(xì)胞培養(yǎng)物；Cy5（品紅色）：β-III微管蛋白；Rhod（紅色）：NG2蛋白，GFP（綠色）：Nestin蛋白；DAPI（藍(lán)色）：細(xì)胞核。圖片由美國徠卡顯微系統(tǒng)公司的 Louise Bertrand 拍攝。

 

小鼠腎臟切片 - THUNDER技術(shù)-3D組織成像

小鼠腎臟切片，含 Alexa Fluor™ 488 WGA、Alexa Fluor™ 568 磷脂色素和 DAPI。樣品為美國馬薩諸塞州沃爾瑟姆市賽默飛世爾科技公司生產(chǎn)的 FluoCells™ 制備的 3 號載玻片。

 

斑馬魚心臟 - THUNDER技術(shù)組織成像

斑馬魚心臟，DAPI（細(xì)胞核，藍(lán)色）、肌球蛋白（心肌細(xì)胞，紅色）和 GFP（原始心臟層，綠色）。瑞士弗里堡大學(xué) Anna Jazwinska 提供。

 

斑馬魚胚胎 - THUNDER技術(shù)-模式生物成像

斑馬魚胚胎 6 dpf，HPCs 穩(wěn)定表達(dá) mCherry，VEC 穩(wěn)定表達(dá) GFP。

由中國閩南師范大學(xué)薛宇博士提供。

 

C2C12 細(xì)胞

THUNDER Imager 3D活細(xì)胞和3D細(xì)胞培養(yǎng)儀

C2C12 細(xì)胞生長并遷移到 transwell 膜的兩側(cè)，然后用層粘蛋白 B（品紅色）染色以顯示核結(jié)構(gòu)，用 Hoechst（藍(lán)色）染色以顯示 DNA，用 γH2AX（黃色）染色以顯示 DNA 損傷。使用THUNDER技術(shù)3D活細(xì)胞和 63X/1.4 油浸物鏡對細(xì)胞進(jìn)行成像。上面的圖像是 17.47 微米厚 Z 疊的擴(kuò)展景深投影。左圖為原始外熒光數(shù)據(jù)，右圖為經(jīng)過 LVCC 處理的THUNDER圖像。

圖片由美國加州大學(xué)戴維斯分校生物科學(xué)院神經(jīng)生物學(xué)、生理學(xué)和行為系 Lucas Smith 博士提供。

 

病毒標(biāo)記神經(jīng)元 - THUNDER技術(shù)-模式生物成像

病毒標(biāo)記的神經(jīng)元（紅色）和星形膠質(zhì)細(xì)胞（綠色）在人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞衍生的皮質(zhì)球體內(nèi)。THUNDER技術(shù)模式生物配有 3.4 倍變焦的 2x 0.15 NA 物鏡，用于生成這張 425 µm Z 堆棧（26 個(gè)位置），在此作為擴(kuò)展景深 (EDoF) 投影展示。

圖片由美國加利福尼亞州 Sergiu Pasca 博士實(shí)驗(yàn)室的 Fikri Birey 博士提供。

 

轉(zhuǎn)基因果蠅眼睛感光器

THUNDER技術(shù)-3D細(xì)胞培養(yǎng)

轉(zhuǎn)基因果蠅的眼部感光器，其橫紋肌上有 EGFP 標(biāo)記，受犀牛蛋白 1 啟動子（ninaE-EGFP）控制。

美國加利福尼亞州南舊金山基因泰克公司 Navid Nouri 提供。

 

耳蝸細(xì)胞 - THUNDER技術(shù)-3D組織成像

孵化后第 7 天的雞耳蝸細(xì)胞。80 微米振鏡切片，肌球蛋白 7a - 感覺毛細(xì)胞，Sox2 - 支持細(xì)胞。

圖片由美國加利福尼亞州 Amanda Janesick 提供。

 

神經(jīng)肌肉接頭 - THUNDER技術(shù)-3D組織成像

通過免疫染色神經(jīng)絲蛋白和β-Bungarotoxin觀察神經(jīng)肌肉接頭。圖片由美國加利福尼亞州的 Andrea Yung 提供。

 

海葵息肉（Exaiptasia pallida）

THUNDER技術(shù)模式生物

海葵息肉（Exaiptasia pallida）在THUNDER技術(shù)模式生物下的 RFP 和 GFP 熒光通道。海葵的胃皮細(xì)胞中寄生著雙鞭毛藻，由于其葉綠素自發(fā)熒光，在 RFP 通道中可以看到這些雙鞭毛藻。海葵本身在口腔周圍和一些觸手周圍顯示綠色熒光帶。

圖片由美國加利福尼亞州 Christian Renicke 提供。

 

小鼠肺 - THUNDER技術(shù)組織成像

小鼠肺部，用 FITC、Cy3、Alexa 633 染色，使用 20 倍物鏡和擴(kuò)展景深 (EDOF) 拍攝。

圖片由美國加利福尼亞州 Ross Metzger 提供。

 

顯示淀粉樣斑塊的海馬體

THUNDER Imager 3D 細(xì)胞培養(yǎng)儀

小鼠海馬的縱向腦切片，顯示淀粉樣蛋白斑塊（綠色，用 6E10 抗體染色，抗β淀粉樣蛋白標(biāo)記物；藍(lán)色，DAPI(綠色，用 6E10 抗體染色，抗-β淀粉樣蛋白的標(biāo)記物），周圍是小膠質(zhì)細(xì)胞/小噬細(xì)胞（紅色，用抗-Abi1 抗體染色；藍(lán)色，DAPI）。

左圖--原始數(shù)據(jù)與擴(kuò)展景深投影；

右圖--大體積Computational Clearing Z 疊加擴(kuò)展景深投影。

圖片由美國加利福尼亞州 Mehrdad Shamloo 教授提供。

 

神經(jīng)嵴（NC）胚胎細(xì)胞群

THUNDER Imager 3D 細(xì)胞培養(yǎng)儀

上圖是使用THUNDER技術(shù) 3D 細(xì)胞培養(yǎng)器，使用 1.3 NA 40x plan apo oil 物鏡拍攝的。上圖為原始寬場數(shù)據(jù)。下圖是應(yīng)用徠卡專有的小體積Computational Clearing (SVCC) 技術(shù)去除焦外模糊并更好地顯示樣本內(nèi)部潛在結(jié)構(gòu)后的結(jié)果。

圖片由美國加利福尼亞州帕薩迪納市加州理工學(xué)院布朗納實(shí)驗(yàn)室 Michael Piacentino 提供。

 

成年小鼠卵巢

THUNDER技術(shù) 3D 細(xì)胞培養(yǎng)儀

將成年小鼠卵巢固定并用抗-NOBOX 染色，然后用改良 3DISCO 清除。將卵巢放入一個(gè)自制的孔中，孔底鋪上蓋玻片，然后在THUNDER 3D細(xì)胞培養(yǎng)成像系統(tǒng)上用 10X/0.32 物鏡進(jìn)行成像。

視頻顯示了合并的 4 層馬賽克、586µm 厚的 Z 疊的三維投影，即原始外熒光圖像和 LVCC 后的THUNDER處理圖像。

視頻由美國加州大學(xué)舊金山分校 Diana Laird 和 Bikem Soygur 博士提供

 

C.elegans - THUNDER技術(shù)模式生物

該菌株MAH215（Chang等人，Elife，2017）是一種雙熒光mCherry::GFP::LGG-1蛋白，通過可視化自噬體（APs）以及自溶酶體（ALs）來監(jiān)測秀麗隱桿線蟲的自噬通量。

綠色點(diǎn)狀物（GFP）是自噬體，而自噬體在酸性環(huán)境中會淬滅 GFP，只發(fā)出 mCherry 信號。

圖片由美國賓夕法尼亞州匹茲堡大學(xué) Aditi U. Gurkar 博士提供

 

腎臟切片 - THUNDER技術(shù) 3D 組織成像

腎臟，用 DAPI、WGA-FITC 和 Phalloidin-568 染色。z=20微米。圖片由德國巴特諾海姆馬克斯-普朗克心肺研究所 Kerstin Troidl 博士提供

 

視網(wǎng)膜切片 - THUNDER技術(shù) 3D 組織成像

視網(wǎng)膜切片，PECAM-488、AF-555 染色。z=30微米。圖片由德國巴特諾海姆馬克斯-普朗克心肺研究所 Kerstin Wilhelm 博士提供

 

心臟切片 - THUNDER技術(shù) 3D 組織成像

心臟切片 - THUNDER Imager 3D 組織。用 DAPI、αSMA-FITC 和 Vimentin-Cy3 染色的心臟切片。z=40µm。圖片由德國巴特諾海姆馬克斯-普朗克心肺研究所 André Schneider 博士提供

 

肝臟切片 - THUNDER技術(shù)-3D 組織成像

用 DAPI、SERVA、CD31-594 染色的肝臟切片。z=70µm。

圖片由德國巴特諾海姆馬克斯-普朗克心肺研究所 Remy Bonnavion 博士提供

 

腦切片 - THUNDER技術(shù)-3D 組織成像

用 DAPI、αGFAP-AF647 染色的腦切片。z=100µm。圖片由德國巴特諾海姆馬克斯-普朗克心肺研究所 Hong Xu 博士提供

 

小鼠視網(wǎng)膜 - THUNDER技術(shù)-3D細(xì)胞培養(yǎng)

固定小鼠視網(wǎng)膜并用以下試劑染色：抗 CD31 抗體（綠色）：內(nèi)皮細(xì)胞，IsoB4（紅色）：小膠質(zhì)細(xì)胞抗 GFAP 抗體（藍(lán)色）：星形膠質(zhì)細(xì)胞

樣本由美國南舊金山基因泰克公司杰里米-伯頓（Jeremy Burton）博士和 Jiyeon Lee 博士提供。成像者：Olga Davydenko 博士（徠卡公司）

 

小鼠主動脈 - THUNDER技術(shù)-3D組織成像

紅線--彈性層，綠色和紅色--血管細(xì)胞，藍(lán)色--DAPI，圖片由美國加利福尼亞州 Ying Wang 提供

紅線--彈性層，綠色和紅色--血管細(xì)胞，藍(lán)色--DAPI，用 LAS X 3D Viewer 顯示。圖片由美國加利福尼亞州 Ying Wang 提供

 

纖維 - THUNDER技術(shù)-3D細(xì)胞培養(yǎng)

纖維被熒光素標(biāo)記。目的是研究動態(tài)和孔隙。55 幅圖像的 Z 疊（130 微米）。圖片由美國德克薩斯州休斯頓萊斯大學(xué)生物工程系 Mollie Smoak 提供

 

小鼠晶狀體切片

THUNDER技術(shù)-3D細(xì)胞培養(yǎng)

本幻燈片是小鼠成人晶狀體橫切面，顯示纖維晶狀體細(xì)胞組織（綠色，用抗β-catenin 抗體（BDB610153）染色，這是一種膜蛋白）和 Afadin（紅色，用抗Afadin（PA1-25076）染色，這是一種肌動蛋白絲結(jié)合蛋白，藍(lán)色，Hoechst）。

圖片由美國俄亥俄州立大學(xué) Plagemen 實(shí)驗(yàn)室 Nathalie Houssin 博士提供

 

人肝祖細(xì)胞 (HPC)

THUNDER技術(shù)-3D組織成像

人肝祖細(xì)胞（HPC）在器官組織肝細(xì)胞中的擴(kuò)增和分化。使用 HC PL Fluotar 40x/0.60 物鏡拍攝的 Z 疊片總厚度為 85µm，共 123 個(gè) Z 步。DAPI（白色）：細(xì)胞核。Alexa488™（綠色）：上皮細(xì)胞粘附分子（EpCAM）。PerCP-Cy5.5（紅色）：信號轉(zhuǎn)換器 CD24。PE（藍(lán)色）：原蛋白-1（CD133）。

樣本由英國諾丁漢大學(xué) E131 Andy Bennett 實(shí)驗(yàn)室 Fatima Abukunna 博士提供。

 

小鼠肺 - THUNDER技術(shù)-3D細(xì)胞培養(yǎng)

為研究 I 型肺泡上皮細(xì)胞（AT1）生物學(xué)而染色的小鼠肺組織。黃色表示 AT1 細(xì)胞系痕跡（GFP），洋紅色表示前糖化終產(chǎn)物受體（RAGE），青色表示水腫素 5（AQP5），灰色表示細(xì)胞核（DAPI）。圖片由美國加利福尼亞州 Yana Kazadaeva 提供。

 

果蠅卵泡 - THUNDER技術(shù)-3D細(xì)胞培養(yǎng)

果蠅蓇葖果在THUNDER技術(shù) 3D 細(xì)胞培養(yǎng)上用 63X/1.4 油浸物鏡成像。上面的視頻是 27.5 微米厚的 Z 疊的三維最大投影。視頻顯示了原始外熒光數(shù)據(jù)和經(jīng)過 LVCC 處理的THUNDER技術(shù)圖像。
圖片由美國加州大學(xué)伯克利分校 Mark Khoury 和 David Bilder 提供

 

鹽水蝦腿 - THUNDER技術(shù)-3D細(xì)胞培養(yǎng)

使用 Rhod、GFP 和 DAPI 濾光片采集的自發(fā)熒光。

使用 DMi8、HC PL APO 63x/1.40 Oil Objective 和 DFC9000 GT 攝像機(jī)采集圖像。

圖像大小為 2048 x 2048 像素，274 個(gè) Z 截面。

圖像由美國徠卡顯微系統(tǒng)公司的 Louise Bertrand 拍攝。

 

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