賽默飛高效液相色譜儀HPLC使用說明書

1. 開機（軟件）：雙擊“控制器”，點擊“啟動儀器控制”，待儀器顯示“運行空閑”，雙擊“變色龍軟件7”進入色譜工作站，工作站左上角“模塊狀態”顯示“Connected”，表示連接成功。

2. 排氣：打開輸液泵的蓋子，找到輸液泵的排氣閥，擰松排氣閥（逆時針）擰松一圈半到兩圈，將A流動比例設為100%，泵流速設為3ml/min（具體自己定），點擊沖洗按鈕，在排氣閥打開的情況下忽略警告執行。重復上述操作，分別進行b、c、d流路的排氣操作，一般排氣60s。在此期間觀察各流路軟管內是否有氣泡，確保氣泡完全排除。結束后再次點擊沖洗按鈕，停止排氣，擰緊排氣閥。（此處要注意，在擰緊排氣閥之前，一定要將流速降低，確保壓力在正常范圍小于150bar）

在加樣前，選擇自動進樣器選項，依次進行灌注注射器、清洗緩沖環、外部清洗針。

3. 創建儀器方法：點擊創建 → 選擇儀器方法 → 設定運行時間（） → 取消選擇所有通道 → 點擊下一步 → 編寫各瓶溶劑名稱 → 下一步 → 刪除平衡階段 → 編寫儀器方法（每一個時間不代表區間，僅代表著該時間點的流速以及各相比例） → 下一步 → 采用默認的進樣針參數 → 下一步 → 采用默認的進樣模式 → 下一步 → 進行溫度控制（具體自己設，本實驗條件為30℃） → 下一步 → 設置波長信號 → 直至完成，在方法界面里，左上角保存改儀器方法。

4. 平衡基線：流速設為1ml/min，有機相：流動相比例設置為（自己設），點擊馬達，啟動輸液泵；點擊UV選項，設置波長，點擊紫外燈，點燈成功會有打鉤。 有機相與流動相比例不斷進行調整，直到進樣需要的條件，本實驗從100%有機相到20%有機相。

5. 處理方法的創建：選擇創建菜單下的處理方法，選擇基本定量 → 下一步 → 命名處理方法并保存 → 打開 → 完成。 采用儀器的默認數據處理方法。

6. 樣品檢測：序列創建：創建菜單 → 序列 → 編寫相關信息 → 下一步 → 瀏覽 → 選擇建好的儀器方法和處理方法 → 下一步直至完成，命名序列并完成。待到基線平衡后，在數據點擊開始運行。可以在儀器操作界面看到當前情況。（此處要注意隊列中前面的隊列已完成）

7. 清洗柱子（清洗色譜儀先水洗，后醇洗，柱子需要保存在100%有機相中，分為快洗和慢洗，此處描寫快洗方法，需要時刻注意壓力值）：快洗：先將調到100%醇:0%水 → 0%醇:100%水 → 100%醇0%水進行柱子保存。

（打開UV界面的紫外燈，再打開位于界面最上方的基線監視）

慢洗：創建儀器方法同上，運行時間盡可能大，在編寫儀器方法時，可嘗試如下編寫。（0min時各相比例應與HPLC工作時的比例相同；需確保各相試劑充足；具體流速需根據A:B=1：1時進行調整，此比例下柱壓最大）