Western Blot實驗中封閉液的選擇

封閉是Western Blot 至關重要的一部分， 所以正確的封閉液選擇可以讓抗體更特異地和抗原結合，為成功的WB奠定基礎。雖然這個步驟操作簡單，但是封閉液的選擇確是很多科研人員的難題。為了讓大家更方便的選擇適合自己實驗的封閉液，這里給大家介紹6種不同的封閉液，以及它們的優缺點。

1、脫脂奶粉
最好買的封閉劑就屬脫脂奶粉了。無論是從化學制品公司還是從超市購買，都可以直接拿來使用。通常封閉液的濃度為 2.5-5% （w/v）。但值得注意的是，脫脂奶粉是許多種蛋白質的混合物，其中含有酪蛋白，是一種磷蛋白。如果你的目標蛋白是磷蛋白的話，千萬不要選擇脫脂奶粉，否則會有很多背景信號。即使你的目標蛋白不是磷蛋白，因為是蛋白質的混合物，所以也容易產生較高的背景信號。

2、牛血清白蛋白(BSA)
牛血清白蛋白是從牛血清中提純之后的一種球蛋白，是除了脫脂奶粉之外，非常常用的封閉劑。通常含有BSA的封閉液的濃度為2-5%（w/v）。但大家也可 以根據自己實驗的需要來改變濃度，因為價格比較高，所以很多研究人員都是用盡可能低而有效的濃度。雖然BSA不是磷蛋白而且是單一蛋白，但是提純過程中有 可能含有IgG或其他血清蛋白等污染物，這些蛋白都可以和哺乳動物抗體產生交叉反應，會增加非特異性背景信號 。

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3、全血清
全血清是許多蛋白質的混合物，例如胎牛血清、兔血清、山羊血清等，同樣可以被用來當做封閉劑。大家對它的使用率很低，因為跟脫脂奶粉和BSA相比，并沒有什么突出的好處，但價格卻更貴。通常使用的濃度為 5-10%（w/v）。像BSA一樣，它含有免疫球蛋白和血清蛋白，會和哺乳動物抗體產生交叉反應。

4、魚膠
用魚膠當封閉液是從豬皮膠演變而來的。魚膠是從冷水魚的皮膚中提取出來的，即使在溫度較低的情況下也會不會凝固。通常使用的濃度為0.1-5% （w/v）。不像脫脂奶粉和BSA，它不含有任何的血清蛋白，所以就不會和哺乳動物抗體產生交叉反應，大大降低了背景信號。但是魚膠不能用來封閉生物素- 抗生物素抗體蛋白系統，因為它含有內源性生物素。

5、PVP（polyvinyl pyrrolidone）
PVP 是傳統封閉液的非蛋白質性質的替代品。雖然早在1993年就有文獻發表，在封閉技術上卻是很新的產品。PVP是一種水溶性多聚物，可以很快和硝酸纖維素和PVDF膜結合。通常使用的濃度在0.5-2%（w/v），而且通常會和其他封閉劑一起使用。PVP 在用于檢測較小目標蛋白的時候非常有效。

6、商品化封閉液
商品化封閉液通常含有提純過的蛋白，用這個封閉液的好處就是你可以確定里面不含有磷蛋白、免疫球蛋白、白蛋白、生物素 等其他封閉液中難以避免的成分。當然，價格也就更貴。每個商品化封閉液都有自己的Protocol，基本照做就沒問題，而且封閉時間很快。

相信大家現在對各種封閉液都有了更全面的了解。總的來說，封閉液的選擇基于三樣事情：抗體、目標蛋白和檢測系統。但是要想找到適合自己目標蛋白的封閉液，并不簡單。除了排出一些很明顯不合適的，剩下的就需要多花點時間嘗試不同種類、不同濃度的封閉液，才能找到最適合的。