使用超高效合相色譜(UPC2)對奈必洛爾對映體進行分離
Saikat Bhattacharya、Dilshad Pullancheri和Gopal Vaidyanathan
沃特世印度公司（印度班加羅爾）
目的
展示一種采用超高效合相色譜（UltraPerformanceConvergence ChromatographyTM，UPC2®）對奈必洛爾對映異構體進行分離的快速、簡單且經濟有效的方法。
背景
奈必洛爾（圖1）是一種β-受體阻斷劑，具有一氧化氮增強性血管擴張作用，可用于治療高血壓。β-受體阻斷劑是全世界范圍內最常見的用于治療高血壓和心臟病的推薦和指定藥物。研究表明，奈必洛爾的D-異構體對β選擇性具有主要作用，而L-異構體可能具有D-異構體的抗高血壓作用。通常需要進行對映體分析以監測兩種異構體的代謝通路。由于需要篩查多個手性固定相，因此這類化合物的手性分離方法開發往往十分耗時。通常情況下，采用正相溶劑的手性分
析色譜柱再生時間長。傳統正相色譜所用的溶劑（例如，正己烷、鹵代溶劑等）有毒，使用和棄置處理費用高。
與傳統LC方法相比，采用UPC2分離奈必洛爾最高可節省65%的分析成本，并提升最高80%的分析通量。
解決方案
手性分析通常在藥物開發的早期階段中進行。由于合相色譜具有卓越的分離能力和較高的分析速度，已被證明是一款功能強大的手性分析技術。使用合相色譜還可減少有毒溶劑（通常與正相LC手性分析相關）的使用。
沃特世（Waters®）ACQUITY UPC2系統采用超臨界CO2作為主要流動相。UPC2技術將UPLC®的性能優勢充分應用到了超臨界流體色譜（SFC）中。UPC2可在極短的時間內完成藥物化合物對映體分離方法的篩查和開發，同時還能減少溶劑消耗量。
本研究展示了一種使用UPC2對奈必洛爾對映異構體進行體分離的快速、高效的方法。本文展示的方法中，奈必洛爾標準品溶解在100%甲醇中，濃度為500 ppm。ACQUITY UPC2系統與4.6×150 mm，3 μm手性柱和ACQUITY UPC2PDA檢測器（波長220 nm）聯用。
采用上述方法，奈必洛爾異構體的USP分離度為2.1。
多次連續進樣的結果表現出高度的重現性，20次重復進樣的保留時間和峰面積的%RSD值分別為0.1和1.0。
總結
本實驗通過配備3 μm色譜柱的ACQUITY UPC2系統展示了一種簡單、高效的奈必洛爾對映體分離方法。實驗中，奈必洛爾異構體在6 min內實現了基線分離。本文展示的方法相比于傳統LC方法，最高可節省65%的分析成本，并提
升最高80%的分析通量。與此同時，目前用于奈必洛爾分析的HPLC正相方法建議在開始分析色譜柱需平衡12到15 h，而使用本文描述的方法時，在UPC2中色譜柱只需平衡5到10 min。多次進樣結果顯示此方法具有高度可重現性。
所使用的流動相與質譜儀兼容，因此有效拓寬了UPC2在生物分析研究方面的應用范圍。
