鹽酸美金剛片中N-（二甲基金剛烷）甘氨酸（DMAG）的測定
應用ACQUITY UPLC /Xevo G2-S QTof系統測定鹽酸美金剛片中
N-(二甲基金剛烷)甘氨酸(DMAG)的含量
王志英
沃特世科技(上海)有限公司
前言：
鹽酸美金剛(Memantine hydrochloride)為抗老年癡呆藥物，是第一個對老年癡呆癥有顯著療效的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)拮抗藥，它可以改善記憶過程所需谷氨酸的傳遞，并具有較好的耐受性。它是美國聯邦食品和藥品管理局(FDA)批準治療中度與重度老年癡呆癥的第一種藥物。
N-(二甲基金剛烷)甘氨酸(DMAG)是鹽酸美金剛片中已知的雜質之一，在國家局發布的進口藥品注冊標準(JX20120025)中規定其含量不得到過0.5%。DMAG本身無紫外吸收，進口藥品注冊標準中采用加內標的質譜方法檢測，檢測時間需30 min，本應用紀要直接采用外標法進行N-(二甲基金剛烷)甘氨酸的檢測。
Xevo G2-S QTof可得到最準確的分子量，具有卓越的定性性能，同時它也有優良的定量能力。本方案應用Xevo G2-S QTof的定量能力來檢測鹽酸美金剛片中N-(二甲基金剛烷)甘氨酸的含量。利于Xevo G2-S QTof的定量方式為：對樣品進行全掃描(full scan)，再從得到的數據中提取關注的分子量進行處理計算。這種定量檢測方式有幾個好處，一是全掃描的數據可得到樣品最全面的信息，讓我們對樣品更了解；二是更有利于開發方法，很方便就看出是否有共流出干擾，保證方法的穩定性和可靠性；三是一次可以對無數個化合物進行定量檢測；四是若事后出現事故調查時，可從已有數據中得到更多信息。
實驗條件：
樣品制備：取鹽酸美金剛片1 片，精密加甲醇-水(50：50)1mL，渦漩2次，每次5秒，兩次間隔1 min，確保樣品完全崩解后，經0.22 μm 微孔濾膜濾過，精密量取續濾液10 μL，置1.5 mL進樣瓶中，精密加入甲醇-水(50:50)990 μL，混勻，即得。對照溶液的配制：分別配置包含相同濃度的鹽酸美金剛和N-(二甲基金剛烷)甘氨酸對照品混合溶液，稀釋劑為甲醇-水(50:50)，1到10號對照品溶液濃度，如表1。
結果與討論：
進口藥品注冊標準中采集的方法時間較長，為30 min一針，改用1.7 μm的BEH C18 100 x 2.1 mm色譜柱，應用HPLC到UPLC的方法轉換器將方法進行同步轉換，采集時間可縮短至5 min。并且將流動相中的三氟乙酸改為甲酸
的溶液。DMAG和鹽酸美金剛分離度良好，如圖1。
靈敏度測試：對照品10號溶液，即DMAG的含量為1 ng/mL，進3 μL時，S/N(PtP)=41.7；當進樣量改為1 μL
時，S/N(PtP)=10.9，此時柱上樣量為1 pg，此濃度可作為定量限，如圖2。
圖2. DMAG的提取離子流圖：對照品10號溶液進3 μL、
對照品10號溶液進1 μL
重現性：進9號對照品溶液，即DMAG濃度為10 ng/mL，重復進樣三次，%RSD=0.47。TargetLynx可自動進行質
量數提取、峰面積積分并計算，如圖3。
圖3. TargetLynx軟件對9號對照品溶液連續進三針
所得DMAG自動計算%RSD
線性：采用進口注冊標準中y=ax2+bx+c方式做回歸曲線。所得結果如圖4。應用軟件自動計算線性，得到的線性方程為y=-0.000919094X2 +15.9004X-1.93231；r=0.9994；TargetLynx界面簡潔，可從結果列表中快速讀取線性方程信息及供試品中DMAG的含量。供試品鹽酸美金剛中含有6.1 ng/mL的N-(二甲基金剛烷)甘氨酸。
圖4. TargetLynx軟件自動線性回歸，自動計算出樣品中含量
結論：
本實驗將常規HPLC色譜柱檢測方法平行轉化為亞2 μm的UPLC色譜柱檢測，分析時間由30 min縮短至
5 min，大大提高分析效率。Xevo G2-S QTof一方面可得到最準確的分子量用于化合物的定性，同時在定
量方面也表現突出。具有較高的靈敏度，N-(二甲基金剛烷)甘氨酸柱上樣量1 pg可被定量檢測；具有
良好的重現性，三針重現性%RSD=0.47%(10 ng/mL)；較寬的線性范圍，濃度在1~5000 ng/mL濃度范圍
內，線性方程系數R=0.9994。 軟件MassLynx/TargetLynx應用簡便，自動進行線性回歸并計算樣品中含
量。所以說ACQUITY UPLC /Xevo G2-S QTof系統在定性和定量方面都表現出色，完全可以滿足藥物研發、
分析過程中需求。
