利用Xevo TQD定量測定基因毒性雜質
利用Xevo TQD定量測定基因毒性雜質
Joanne Mather, Dominic Moore, Robert S. Plumb 和 Paul Rainville
沃特世公司(美國馬薩諸塞州米爾福德)
簡介：
烷基磺酸，尤其是甲磺酸、苯磺酸和對甲苯磺酸，作為一類常用 的烷化劑，在制藥行業中常被用作烷基化試劑和催化劑，并在API 的化學合成中用于純化步驟。此外，為了改善化學性質或提高生 物利用度，這些磺酸也常用作藥物的最終成鹽。
合成反應或再結晶步驟中任何殘留醇的存在都可能導致形成磺酸 的烷基酯。許多此類甲磺酸酯、苯磺酸酯或甲苯磺酸酯都被認為 具有基因毒性，而其它酯類也可能存在基因毒性，因此需要在藥 物和藥品中進行監測。
過去用于分析此類烷基磺酸酯的典型方法均建立在GC/MS或HPLC/UV/ MS的基礎之上，其中的衍生化步驟通常需要大約20到30分鐘的運 行時間。之前，我們已經展示了如何通過使用UPLC?/MS在不到5分 鐘的運行時間內獲得良好的結果。
在這篇應用紀要中，我們將會介紹儀器設備的最新進展如何針對 這些基因毒性雜質提供更強的分析能力和易用性。我們還將展示 如何利用具有正負離子切換功能的Xevo TQD所擁有的高靈敏度縮短 此類雜質的分析時間。此外，利用RADAR?降低基質干擾有助于加 快方法開發過程。
實驗：
液相色譜條件：
LC系統： ACQUITY UPLC
色譜柱： ACQUITY UPLC HSS T3色譜柱，
2.1 x 50 mm, 1.8 μm
柱溫： 45 ?C
進樣體積： 15 μL(20 μL定量環，部分定量環模式)
流動相A： 98 H20 2% MeOH 0.1%甲酸
流動相B： 98 MeOH 2% H2O 0.1%甲酸
| 梯度表 時間(min) |
流速 |
%A |
%B |
曲線 |
|
初始 |
0.600 |
95.0 |
5.0 |
—— |
|
2.50 |
0.600 |
2.0 |
98.0 |
6 |
|
3.00 |
0.600 |
2.0 |
98.0 |
6 |
|
4.00 |
0.600 |
95.0 |
5.0 |
1 |
|
4.50 |
0.600 |
95.0 |
5.0 |
1 |
負離子模式：
毛細管電壓： 0.8 kV
功能類型： 3通道的MRM
|
通道反應 |
錐孔電壓 |
碰撞能量 |
化合物 |
|
95.00 > 79.90 |
40.0 |
15.0 |
甲磺酸 |
|
157.00 > 79.90 |
45.0 |
24.0 |
苯磺酸 |
|
171.00 > 79.90 |
48.0 |
26.0 |
家苯磺酸 |
正離子模式:
毛細管電壓： 0.5 kV
|
通道反應 |
錐孔電壓 |
碰撞能量 |
化合物 |
|
173.10 > 77.00 |
25.0 |
16.0 |
甲苯磺酸酯 |
|
187.00 > 77.00 |
25.0 |
22.0 |
苯磺酸乙酯 |
|
187.00 > 155.00 |
30.0 |
10.0 |
對甲苯磺酸甲酯 |
|
201.00 > 173.00 |
25.0 |
10.0 |
對甲苯磺酸乙酯 |
|
229.10 > 91.00 |
40.0 |
20.0 |
2S縮水甘油基對甲苯磺酸酯 |
結果與討論：
使用乙腈為多種已知基因毒性雜質配制1 mg/mL 標準溶液，然后用5%乙腈將濃度稀釋為0.1 至500 ng/mL。此外，還制備了一種樣品溶液： 將10 mg苯磺酸氨氯地平片磨碎并溶解，然 后標準添加1.5 μg基因毒性雜質。
借助于IntelliStart，使用各個標準溶液幫助調 諧MS。即便在最佳的色譜性能下，也可能發 生共流出。在采集多重反應監測(MRM)定量 質譜數據的同時，采集來自于基質的定性質 譜掃描數據有助于監測可能的干擾化合物， 從而確保檢測的耐用性和重現性。
在RADAR模式下，采集MRM數據的同時可以采 集正離子和負離子模式下整個范圍的MS全掃 描譜圖。該過程對MRM數據質量基本無影響。 因此，您可以在準確定量目標化合物的同時， 追蹤其它樣品基質的組分，從而讓您對樣品 有更加深入的理解。
RADAR功能之所以可以實現，是建立在Xevo TQD在MS、MS/MS、正離子與負離子模式超快 的切換速度且不會影響性能的基礎之上的。 使用RADAR輔助LC/MS/MS方法開發，以對加標 藥片溶液中的雜質進行分析。利用最終所開 發的方法來驗證這套液質系統對基因毒性雜 質檢測的線性和靈敏度
結論：
與UPLC聯用，串聯四極桿檢測器Xevo TQD是基因毒性雜質分析的最佳工具。UPLC/Xevo TQD可以提供很好的靈敏度及快速 的分析方法。利用其多種特點，如IntelliStart和RADAR、正負 離子切換以及“所有時間內所有數據”的生成，可快速輕松 地開發出檢測的分析方法。這將顯著提高了實驗室效率， 以應對不斷增長的科研和監管需求。
