HPLC 故障及排除方法
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診狀 |
可能的原因 |
解 決 方 法 |
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（ 一 ） 保留時間變化 |
1. 柱溫變化 |
柱恒溫 |
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2. 等度與梯度間未能充分平衡 |
至少用 10 倍柱體積的流動相平衡柱 | |
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3. 緩沖液容量不夠 |
用 >25mmol/L 的緩沖液 | |
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4. 柱污染 |
每天沖洗柱 | |
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5. 柱內(nèi)條件變化 |
穩(wěn)定進(jìn)樣條件 , 調(diào)節(jié)流動相 | |
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6. 柱快達(dá)到壽命 |
采用保護(hù)柱 | |
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（ 二 ） 保留時間縮短 |
1. 流速增加 |
檢查泵 , 重新設(shè)定流速 |
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2. 樣品超載 |
降低樣品量 | |
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3. 鍵合相流失 |
流動相 PH 值保持在 3~7.5 檢查柱的方向 | |
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4. 流動相組成變化 |
防止流動相蒸發(fā)或沉淀 | |
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5. 溫度增加 |
柱恒溫 | |
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（ 三 ） 保留時間延長 |
1. 流速下降 |
管路泄漏 , 更換泵密封圈 , 排除泵內(nèi)氣泡 |
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2. 硅膠柱上活性點變化 |
用流動相改性劑 , 如加三乙胺 , 或采用堿至鈍化柱 | |
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3. 鍵合相流失 |
同前 （ 二 ）3 | |
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4. 流動相組成變化 |
同前 （ 二 ）4 | |
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5. 溫度降低 |
同前 （ 二 ）5 | |
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（ 四 ） 出現(xiàn)肩峰或分叉 |
1. 樣品體積過大 |
用流動相配樣 , 總的樣品體積小于第一峰的 15% |
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2. 樣品溶劑過強(qiáng) |
采用較弱的樣品溶劑 | |
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3. 柱塌陷或形成短路通道 |
更換色譜柱 , 采用較弱腐蝕性條件 | |
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4. 柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效 |
更換燒結(jié)不銹鋼 , 加在線過濾器 , 過濾樣品 | |
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5. 進(jìn)樣器損壞 |
更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子 | |
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（ 五 ） 鬼峰 |
1. 進(jìn)樣閥殘余峰 |
每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥 , 改進(jìn)閥和樣品的清洗 |
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2. 樣品中未知物 |
處理樣品 | |
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3. 柱未平衡 |
重新平衡柱 , 用流動相作樣品溶劑 （ 尤其是離子對色譜 ） | |
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4. 三氟乙酸 （TFA） 氧化 （ 肽譜 ） |
每天新配 , 用抗氧化劑 | |
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5. 水污染 （ 反相 ） |
通過變化平衡時間檢查水質(zhì)量,用 HPLC 級的水 | |
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（ 六 ） 基線噪聲 |
1. 氣泡 （ 尖銳峰 ） |
流動相脫氣 , 加柱后背壓 |
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2. 污染 （ 隨機(jī)噪聲 ） |
清洗柱 , 凈化樣品 , 用 HPLC 級試劑 | |
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3. 檢測器燈連續(xù)噪聲 |
更換氘燈 | |
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4. 電干擾 （ 偶然噪聲 ） |
采用穩(wěn)壓電源 , 檢查干擾的來源 （ 如水浴等 ） | |
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5. 檢測器中有氣泡 |
流動相脫氣 , 加柱后背壓 | |
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（ 七 ） 峰拖尾 |
1. 柱超載 |
降低樣品量 , 增加柱直徑采用較高容量的固定相 |
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2. 峰干擾 |
清潔樣品 , 調(diào)整流動相 | |
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3. 硅羥基作用 |
加三乙胺 , 用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相 PH 值 , 鈍化樣品 | |
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4. 同前 （ 四 ）4 |
同前 （ 四 ）4 | |
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5. 同前 （ 四 ）3 |
5. 同前 （ 四 ）3 | |
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6. 死體積或柱外體積過大 |
連接點降至最低 , 對所有連接點作合適調(diào)整 , 盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管 | |
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7. 柱效下降 |
用較低腐蝕條件 , 更換柱 , 采用保護(hù)柱 | |
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（ 八 ） 峰展寬 |
1. 進(jìn)樣體積過大 |
同 （ 四 ）1 |
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2. 在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展 |
進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散 | |
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3. 數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢 |
設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于 10 點 | |
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4. 檢測器時間常數(shù)過大 |
設(shè)定時間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的 10% | |
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5. 流動相粘度過高 |
增加柱溫 , 采用低粘度流動相 | |
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6. 檢測池體積過大 |
用小體積池 , 卸下熱交換器 | |
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7. 保留時間過長 |
等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫 | |
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8. 柱外體積過大 |
將連接管徑和連接管長度降至最小 | |
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9. 樣品過載 |
進(jìn)小濃度小體積樣品 |
