GBT 18397-2001混合飼料中泛酸的測定高效液相色譜法

 

2.1 試驗溶液的制備

2.1.1 復(fù)合預(yù)A合飼料:稱取試樣1-2g 或維生素預(yù)混合飼料0.25-0.5g ,精確至0.0001g ，置于100mL棕色容量瓶中。加60mL水浸濕，搖勻，加10mLl%二乙胺四乙酸二鈉溶液(1.2)混勻，置于超聲波水浴上振蕩提15min。用水定容至刻度混合均勻。過濾或離心。再經(jīng)0.45 um過濾膜過濾，調(diào)整溶液的濃度大于1ug/mL，供高效液相色譜分析用。

2.1.2 濃縮飼料:稱取試樣2-5g ,精確至0.0001g,置于100m L棕色容量瓶中。加60m L水浸濕，搖勻，加10mLl%二乙胺四乙酸二鈉溶液棍勻，置于超聲波水浴上振裁提取15min。提取液若出現(xiàn)混濁，需用幾滴氫氧化鈉溶液(1.5)和鹽酸溶液(1.6)調(diào)節(jié)pH至4.5左右，至溶液澄清(用試紙顯示)沉淀蛋白質(zhì)，用水定容至刻度，以下步驟同2.1.1。

注:當(dāng)濃縮飼料每千克樣品中泛酸含量低于50mg時，可增加稱樣量.

2.2 測定

2.2.1 色譜條件

固定相 : ODS(C18)粒度5um。柱長150mm、內(nèi)徑3.9mm不銹鋼柱。

移動相 : 磷酸緩沖液(1.3),

流速: 1. 0 m L/min

溫度:室溫。

進(jìn)樣量: 10-20ul

檢測器: 紫外檢測器(或二極管矩陣檢測器PDA)使用波長200nm

2.2.2 定量測定

按高效液相色譜儀說明書調(diào)整儀器操作參數(shù)和靈敏度(AUFS)，色譜峰分離符合要求。用兩次以上相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)工作液對系統(tǒng)進(jìn)行校正，向色譜柱注入相應(yīng)的泛酸或泛酸鈣的標(biāo)準(zhǔn)工作液〔1.4.2(Vst)」和試驗溶液「2.1(Vi)〕得到色譜峰面積響應(yīng)值(Pst,Pi)，用外標(biāo)法定量測定。

 

3.1 復(fù)合預(yù)混合飼料中泛酸的含量按式(1)計算:wi=Pi×V×pi×Vsi×f/Pm×m×Vi

wi一每千克試樣中泛酸的含量,mg;

m一試樣質(zhì)量g;

V一提取液的總體積，ml;

pi一泛酸(或泛酸鈣)標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度，ug/mL;

Vsi一泛酸(或泛酸鈣)標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)樣體積，uL;

Vi一從試驗溶液中分取的進(jìn)樣體積，uL;

Pm一與標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)樣體積Vsi)相應(yīng)的峰面積響應(yīng)值;

Pi一與從試驗溶液中分取的進(jìn)樣體積(Vi)相應(yīng)的峰面積響應(yīng)值;

f一轉(zhuǎn)換系數(shù)，用泛酸作標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時，系數(shù)為1;用泛酸鈣作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時轉(zhuǎn)換成泛酸，系數(shù)為0.920 (1 mg泛酸相當(dāng)于1.087mg泛酸鈣)。

3.2 平行測定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，保留小數(shù)點后一位。

每千克試樣中泛酸含量.mg            相對偏差%

50-2000                             ≤士10

 

復(fù)合預(yù)混合飼料中泛酸的測定，目前尚無國際標(biāo)準(zhǔn)可依，本標(biāo)準(zhǔn)是在查閱國內(nèi)外文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，參考《美國全國飼料協(xié)會(NFIA)分析方法概要》報導(dǎo)的方法“高效液相色譜方法測定液體和固體多種維生素添加劑中抗壞血酸、煙酸、煙酞胺、泛酸鈣和泛醇的含量”而制定的。

本標(biāo)準(zhǔn)在技術(shù)內(nèi)容上參考國外方法，其方法原理相同;對范圍、試樣提取條件、稱樣量、高效液相色譜測定條件進(jìn)行了改進(jìn)，并做了明確規(guī)定。該法簡便、快速、準(zhǔn)確。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:國家飼料質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心(北京)。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:陳必芳、李蘭、林東下。