反相高效液相色譜法測(cè)定三越麻黃顆粒中甘草酸的含量

【摘要】目的建立三越麻黃顆粒中甘草酸的反相高效液相色譜(RP�睭PLC)含量測(cè)定方法。方法采用反相高效液相色譜法測(cè)定三越麻黃顆粒中甘草酸含量，KromasilODS��1C18色譜柱（5μm，4.6mm×250mm），流動(dòng)相為乙腈��0.05M磷酸二氫鉀（用三乙胺調(diào)pH5.75）（26.5∶73.5），檢測(cè)波長(zhǎng)為250，柱溫為40℃，流速為1.0ml/min。結(jié)果三越麻黃顆粒顆粒中甘草酸的線性范圍為3.75～154.5μg/ml(r＝0.9998)，加樣回收率100.2%，RSD=2.5%。結(jié)論采用RP-HPLC法測(cè)定甘草酸具有簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)，可為三越麻黃顆粒的質(zhì)量控制提供一定的依據(jù)。

　　【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法甘草酸三越麻黃顆粒

　　三越麻黃顆粒由10味藥材(麻黃、石膏、苦杏仁、板藍(lán)根、甘草、陳皮、柴胡、射干、魚腥草、浙貝母)精制而成。方中甘草為使藥。甘草酸是甘草藥材中的主要指標(biāo)成分之一，擬定該成分的含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)可以反映和控制本品的內(nèi)在質(zhì)量。建立了HPLC法測(cè)定本品中甘草酸的含量，以期達(dá)到能夠準(zhǔn)確定量的目的。

　　1、儀器與試藥

　　1.1儀器Waters2690高效液相色譜儀，Waters2487紫外檢測(cè)器，KromasilODS��1C18色譜柱（5μm,4.6mm×250mm）及保護(hù)柱，電子分析天平（BS110S，北京賽多利斯有限公司）。

　　1.2試藥乙腈為色譜純（一級(jí)），水為重蒸水，其它試劑均為分析純

　　1.3對(duì)照品甘草酸單銨鹽（AldrichChemCo.，批號(hào)23,224��6），使用前置于干燥器中干燥至恒重。

　　2、方法

　　2.1色譜條件流動(dòng)相為乙腈��0.05M磷酸二氫鉀（用三乙胺調(diào)pH5.75）（26.5∶73.5）；檢測(cè)波長(zhǎng)250nm；柱溫40℃；流速1.0ml/min。

　　2.2溶液的配制

　　2.2.1對(duì)照品溶液的制備取甘草酸單銨鹽對(duì)照品約20mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取適量，用甲醇稀釋成每毫升含3.75，7.49，11.59，14.68，18.62，22.40，26.27，30.13，38.63，74.93，154.40μg甘草酸單銨鹽對(duì)照品溶液。

　　2.2.2供試品溶液的制備取本品適量，研細(xì)，精密稱取約1.0000g，至50ml量瓶中，加甲醇約30ml，超聲30min，放冷至室溫，定容至刻度，吸取約2ml過0.45μm濾膜，即得供試品溶液。

　　3、結(jié)果

　　3.1系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)取“2.2.1”項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)品溶液、“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液，照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果見圖1。在上述條件下，橙皮苷和供試品中其它組分色譜峰可達(dá)基線分離，甘草酸與其相鄰色譜峰的分離度大于1.5，以甘草酸峰計(jì)算柱效，其理論板數(shù)（N）為6000以上，拖尾因子T為1.04，同時(shí)取陰性對(duì)照溶液進(jìn)樣。結(jié)果表明，陰性對(duì)照在甘草酸色譜峰位置處無相應(yīng)峰出現(xiàn)。故在系統(tǒng)適用性試驗(yàn)中規(guī)定理論板數(shù)不得低于6000。供試品和陰性對(duì)照的HPLC色譜見圖2～3。

　　3.2線性范圍的考察精密量取甘草酸單銨鹽對(duì)照品系列溶液10μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面積。結(jié)果見表1。并以峰面積值（A）對(duì)濃度（C）進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：A＝5834.7C-8388.1,r＝0.9998。以上結(jié)果表明，在3.75～154.5μg/ml范圍內(nèi)，甘草酸峰面積值（A）與濃度（C）有良好的線性關(guān)系。

　　3.3精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取上述對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，甘草酸峰面積值的RSD為0.28％。結(jié)果見表2。

　　3.4穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取供試品試液（批號(hào)20020729）分別于0，2，4，6，8，10h，進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見表3。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，供試品液在10h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

　　3.5重復(fù)性實(shí)驗(yàn)按擬定的含量測(cè)定方法，對(duì)同一批供試品(20020915)，分別制備6份供試品溶液，測(cè)得峰面積并計(jì)算甘草酸含量。

　　3.6回收率實(shí)驗(yàn)取已知含量的供試品9份（批號(hào)20020825），分別加入0.7725mg/ml的甘草酸對(duì)照品溶液0.46，0.58，0.7ml，按上述供試品制備方法和色譜條件，制備加樣回收供試品溶液并注入液相色譜儀，計(jì)算回收率。

　　3.7供試品測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液適量，按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果見表6。

　　4、討論

　　預(yù)實(shí)驗(yàn)采用《中國(guó)藥典》中甘草項(xiàng)下的HPLC條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果無法實(shí)現(xiàn)復(fù)方制劑中甘草酸的有效分離，在采用文獻(xiàn)的條件進(jìn)行預(yù)試時(shí)發(fā)現(xiàn)有可能實(shí)現(xiàn)預(yù)期的色譜峰分離，因此以該流動(dòng)相系統(tǒng)為基礎(chǔ)進(jìn)行進(jìn)一步的比例優(yōu)化，結(jié)果表明在提高流動(dòng)相酸性的同時(shí)引入一定量的三乙胺不僅可以提高分離效果，也可以起到保護(hù)色譜柱的效果，最終確定流動(dòng)相組成為2%甲醇乙腈-0.1％磷酸和0.1％三乙胺（25∶75），并以該色譜條件為基礎(chǔ)進(jìn)行了方法學(xué)考察。

　　本實(shí)驗(yàn)建立了測(cè)定三越麻黃顆粒中甘草酸含量的高效液相色譜方法。經(jīng)方法學(xué)考察，該方法符合《中國(guó)藥典》中有關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的要求，具有快速靈敏、準(zhǔn)確可靠、簡(jiǎn)便易行、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，可用于控制三越麻黃顆粒的質(zhì)量。