高效液相色譜法測定畜禽肉中土霉素、四環素、金霉素殘留量
1.實驗目的
據標準GB/T 14931.1-94測定畜禽肉中土霉素、四環素、金霉素殘留量。最低檢出濃度為：0.15，0.20，0.65mg/kg。
2.試驗原理
樣品經提取，微孔濾膜過濾后直接進樣，用反相色譜分離，紫外檢測器檢測，與標準比較定量，出峰順序為土霉素、四環素、金霉素。標準加法定量。
3.試劑
3.1 乙腈(分析純)。
3.2 0.01 mol/L磷酸二氫鈉溶液：稱取1.56 g(±0.01g)磷酸二氫鈉(NaH2PH4.2H2O)溶于蒸餾水中，定容到100 mL，經過濾器過濾（選用微孔濾膜為0.45 μm），備用。
3.3 土霉素(OTC)標準溶液：稱取土霉素0.0100g(±0.0001g)，用0.1mol/L鹽酸溶液每毫升含土霉素1mg。
3.4 四環素(TC)標準溶液：稱取四環素0.0100g(±0.001g)，用0.01 mol/L鹽酸溶液溶解并定容10.00 mL，此溶液每毫升含四環素1mg。
3.5 金霉素(CTC)標準溶液：稱取金霉素0.0100g(±0.0001g)，溶于蒸餾水并定容成10.00mL，此溶液每毫升含金霉素1mg。以上標準品均按1000單位/mg折算。3.3～3.5溶液應于4℃以下保存，可使用1周。
3.6 混合標準溶液：取3.3、3.4標準溶液各1.00 mL，取3.5標準溶液2.00 mL，置于10mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度。此溶液每毫升含土霉素、四環素各0.1mg，金霉素0.2mg，臨時現配。
3.7 5％高氯酸溶液。
4.儀器
4.1 高效液相色譜儀(HPLC)：具紫外檢測器。
4.2 振蕩器：天津市恒奧科技發展有限公司
4.3 過濾器：天津市恒奧科技發展有限公司
4.4 超聲波：天津市恒奧科技發展有限公司
5.色譜條件
5.1 柱：ODS-C18 (5 μm) 6.2mm×15 cm。
5.2 檢測波長：355 nm。
5.3 靈敏度：0.002 AUFS。
5.4 柱溫：室溫。
5.5 流速：1.0mL/min。
5.6 進樣量：10 μL。
5.7 流動相：乙腈/0.01 mol/L磷酸二氫鈉溶液(用30％(V/V)硝酸溶液調節pH2.5)，35：65(V/V)，使用前用超聲波脫氣10 min。
6.操作方法
6.1 樣品測定：稱取5.00 g(±0.01 g)切碎的肉樣(＜5 mm)，置于50 mL錐形燒瓶中，加入5％高氯酸25.0mL，于振蕩器上振蕩提取10 min，移入到離心管中，以2000 r/min離心3min，取上清液經0.45μm濾膜過濾，取溶液10μL進樣，記錄峰高，從工作曲線上查得含量。
6.2 工作曲線：分別稱取7份切碎的肉樣，每份5.00 g(±0.01 g)，分別加入混合標準溶液0、25、50、100、150、200、250 μL(含土霉素、四環素各為0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0 μg， 含金霉素0、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0 μg)， 按6.1方法操作，以峰高為縱坐標，以抗生素含量為橫坐標，繪制工作曲線。
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